目的:人巨细胞病毒（human cytomegalovirus,HCMV）是疱疹病毒家族成员之一,是具有庞大且复杂结构的包膜病毒,在人群中感染广泛。病毒自身的蛋白表达、基因组复制、以及病毒颗粒的组装成熟等过程完全依赖于宿主细胞机制。肝X受体（liver X receptor,LXR）是细胞内广泛存在的转录因子,对细胞的生长、发育、分化及新陈代谢都起至关重要的作用。配体激活LXR,产生转录激活和转录抑制两种不同的作用机制,调控靶基因转录。既往对病毒复制机制的研究,主要着眼于病毒自身编码蛋白的生物学功能以及宿主免疫系统对病毒复制的影响,而缺乏关于病毒感染对宿主细胞新陈代谢的影响以及病毒感染引起的宿主细胞新陈代谢产物变化对病毒复制的影响等一系列关键问题的研究。激活LXR是否通过转录调控机制影响与病毒颗粒组装成熟密切相关的病毒基因转录而抑制病毒颗粒的成熟过程,减少病毒颗粒的成熟数量和抑制病毒颗粒的感染能力尚没有明确的研究证实。本研究拟采用LXR激动剂GW3965激活LXR,研究激活LXR对病毒颗粒成熟数量及感染能力的影响;鉴定出受激活LXR转录调控的病毒靶基因;阐明激活LXR抑制病毒靶基因转录的机制;明确抑制病毒靶基因对于病毒滴度的影响;最终阐明激活LXR抑制HCMV病毒颗粒成熟的机制。研究方法:1.培养人包皮成纤维细胞,HFF细胞采用无血清饥饿法培养饥饿24h后加入LXR激动剂处理,对照组加入同体积DMSO。1小时后感染HCMV实验室株Towne BAC,更换新鲜培养基,实验组保持LXR激动剂药物浓度。在感染后的不同时间点2、24、48、72、96、120hpi（hour post infection）超声破碎细胞,收获子代病毒颗粒,采用TCID50的方法滴定病毒感染活性,实时荧光定量PCR检测DNA含量。2.感染后的不同时间点（24、48、72hpi）收集细胞,提取总RNA,采用实时荧光定量PCR方法检测人巨细胞病毒基因的表达。3.HFF细胞接种病毒72h后裂解并提取总蛋白,采用免疫印迹法检测细胞管家蛋白GAPDH以及重要病毒编码蛋白的表达量;同时收集细胞及全部培养液,超速离心获得纯化的病毒颗粒,采用免疫印迹法检测子代病毒颗粒中病毒编码蛋白的表达量。4.LXR激动剂处理人包皮成纤维细胞HFF,在感染72h后收集细胞团块固定于透射电镜专用封闭液中,采用透射电镜观察HCMV衣壳组装和病毒成熟过程。5.HCMV感染HFF细胞并用LXR激活剂GW3965处理细胞72h收集细胞,测定细胞总蛋白量,检测病毒感染细胞中胆固醇含量;超速离心法获得纯化的病毒颗粒,实时荧光定量PCR方法检测纯化病毒颗粒中HCMV基因组DNA含量,定量检测纯化病毒颗粒中的胆固醇含量。结果:1.在感染72小时以后,激活的LXR使HCMV子代病毒滴度显著下降,激活的LXR使HCMV子代病毒基因组DNA拷贝数减少数倍。2.病毒感染72小时后,有9个病毒基因的转录水平不受激活的LXR影响;激活的LXR使至少20个病毒基因的转录水平被显著抑制。3.在感染后72小时,激活的LXR使IE86（UL122）,pp65（UL83）,g B（UL55）和pp28（UL99）等部分病毒基因编码蛋白表达量显著降低,但对于pp52（UL44）蛋白表达影响不大。纯化的病毒颗粒中相关病毒基因编码蛋白的表达情况与全细胞裂解液结果基本一致。4.选择多个视野计数细胞核内三种衣壳的数量,计算比例。在LXR激活和未激活的HCMV感染HFF细胞中A、B、C三种衣壳的数量和百分比之间没有显著差别。随机选取多个感染细胞的VAC区,计数包膜病毒颗粒数并进行统计分析。高比例的包膜异常病毒颗粒存在于LXR激活的感染HFF中。5.LXR激活使感染细胞中的总胆固醇含量显著减少。激活LXR的细胞子代病毒的胆固醇含量明显下降。结论:1.激活的LXR通过影响病毒的成熟释放过程使结构完整的感染性子代病毒数量减少以及减少成熟病毒颗粒中脂质含量降低子代病毒的感染能力。2.LXR激活对于HCMV滴度的抑制是一个从病毒基因转录、基因组DNA复制、病毒颗粒成熟释放以及子代病毒结构等多方面多层次的过程,综合体现出LXR激活对HCMV滴度的显著抑制作用。3.激活LXR在HCMV组装成熟过程中发挥的明显抑制作用,可应用于抗病毒药物的开发中,对HCMV相关疾病的治疗有一定的指导作用。