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目的:
1、观察解脲支原体对小鼠体外受精的影响,以探讨解脲支原体对体外受精的致病作用。
2、观察解脲支原体对小鼠早期胚胎发育的影响,以探讨解脲支原体在早期胚胎发育中的致病作用。
3、为解脲支原体感染的临床治疗提供理论和实验依据。
方法:
1、取小鼠成熟卵丘-卵母细胞复合体随机分为实验组与对照组,在体外加入小鼠精子进行授精,对照组:组1,精卵在不含3型UU的HTF培养液中培养;实验组:组2、组3、组4、组5,精卵分别在含103CCU/ml~106CCU/ml浓度的3型UU的HTF培养液中培养,在37℃、5% CO2的培养箱中培养48小时,每24h在Nikon倒置显微镜下观察记录,通过统计各组的受精率、D2评分、4-细胞期胚胎形成率,评价受精及胚胎发育情况。以观察不同浓度3型UU对小鼠成熟卵子体外受精的影响。
2、将方法1中的3型UU改为8型UU,实验组:组2、组3、组4、组5的UU浓度改为102CCU/ml~105CCU/ml,重复方法1。以观察不同浓度8型UU对小鼠成熟卵子体外受精的影响。
3、取小鼠2细胞期胚胎,随机分为实验组与对照组,对照组:组1,在不含3型UU的HTF培养液中培养;实验组:组2、组3、组4、组5,小鼠2细胞期胚胎分别在含103CCU/ml~106CCU/ml浓度的3型UU的HTF培养液中培养,在37℃、5% CO2的培养箱中培养72小时,每24h在Nikon倒置显微镜下观察记录,通过统计各组的D2评分、4-细胞期胚胎形成率、桑椹期胚胎形成率、囊胚形成率,评价胚胎发育情况。以观察不同浓度3型UU对小鼠早期胚胎发育的影响。
4、将方法3中的3型UU改为8型UU,实验组:组2、组3、组4、组5的UU浓度改为102CCU/ml~105CCU/ml,重复方法3。以观察不同浓度8型UU对小鼠早期胚胎发育的影响。
结果:
1、3型UU在培养液中的终浓度为103CCU/ml组的受精率、D2评分、4-细胞期胚胎形成率等胚胎发育指标与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。而UU终浓度分别为104CCU/ml、105CCU/ml、106CCU/ml组的受精率、D2评分、4-细胞期胚胎形成率与对照组比较均有显著性差异(P<0.05)。
2、8型UU在培养液中的终浓度为102CCU/ml组的受精率、D2评分、4-细胞期胚胎形成率等胚胎发育指标与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。UU终浓度分别为104CCU/ml、105CCU/ml组的受精率、D2评分、4-细胞期胚胎形成率与对照组比较均有显著性差异(P<0.05)。UU终浓度为103CCU/ml组的受精率、4-细胞期胚胎形成率与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05),但其D2评分与对照组比较有显著性差异(P<0.05)。
3、3型UU在培养液中的终浓度分别为103CCU/ml、104CCU/ml、105CCU/ml组2-细胞胚胎以后的D2评分、4-细胞期胚胎形成率、桑椹期胚胎形成率、囊胚形成率等各阶段的胚胎发育指标与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。而UU终浓度为106CCU/ml组各项胚胎发育指标与对照组比较均有显著性差异(P>0.05)。
4、8型UU在培养液中的终浓度为102CCU/ml组2-细胞胚胎以后的D2评分、4-细胞期胚胎形成率、桑椹期胚胎形成率、囊胚形成率等各阶段的胚胎发育指标与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05),终浓度分别为104CCU/ml、105CCU/ml组2-细胞胚胎以后的各项胚胎发育指标与对照组比较均有显著性差异(P<0.05),终浓度分别为103CCU/ml组的4-细胞期胚胎形成率、囊胚形成率与对照组比较无显著性差异(P>0.05),而D2评分、桑椹期胚胎形成率与对照组比较有显著性差异(P<0.05),103CCU/ml组的P值均接近0.05显著性差异临界值。
结论:
1、UU能够干扰小鼠的体外受精,3型UU≥104CCU/ml、8型UU≥103CCU/ml时就可对小鼠的体外受精造成抑制作用。
2、UU能够影响小鼠早期胚胎的发育,3型UU≥106CCU/ml、8型UU≥104CCU/ml时就可阻碍小鼠早期胚胎的发育。
3、叫的致病性与其血清型有关,代表含有较大基因的生物群2(或T960生物型)的血清型8型UU可能较代表含有较小基因的生物群1(或Parvo生物型)的血清型3型UU具有更强的致病性。
4、随着UU浓度的增高,对小鼠体外受精及早期胚胎发育的影响也增大。
5、低浓度的UU(<103CCU/ml)对小鼠体外受精及早期胚胎发育无影响,但其远期效应有待进一步研究。