论文部分内容阅读
目的糖尿病视网膜病变（diabetic retinopathy,DR）是糖尿病最常见和最严重的眼部微血管并发症,越来越多的研究表明,氧化应激在诱导糖尿病形成及DR发生、发展中发挥着极其重要的作用。核因子E2相关因子2（nuclear factor erythroid2-related factor 2,Nrf2）信号通路是目前为止发现的最为重要的内源性抗氧化应激通路,在氧化应激与炎症相关组织损伤中有着重要作用。本实验通过建立2型糖尿病模型,予以Ⅱ相酶诱导剂叔丁基对苯二酚（tert-butylhydroquinone,tBHQ）进行干预,观察tBHQ对2型糖尿病大鼠视网膜血红素氧合酶-1（heme oxygenase-1,HO-1）和血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）表达的影响及对胰岛功能的影响,旨在为DR的早期防治提供实验性理论依据。方法通过喂养高脂高糖饲料联合小剂量链脲佐菌素（Streptozocin,STZ）腹腔注射将40只清洁级雄性Sprague-Dawley大鼠诱导建立2型糖尿病模型。建模成功后随机分为糖尿病组（DM组）和tBHQ干预组（tBHQ组）。同期匹配的10只正常大鼠为对照组（NC组）。于tBHQ干预喂养4w、12w后检测3组大鼠血清胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL-C）和高密度脂蛋白（HDL-C）及空腹血糖（FBG）、空腹胰岛素（FINS）,通过公式计算胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）及胰岛素敏感指数（ISI）。将视网膜组织切片进行苏木精-伊红染色,观察组织病理学形态变化。采用免疫组织化学染色,观察检测HO-1和VEGF在视网膜组织中的表达。应用实时荧光定量PCR检测技术,测定各组大鼠视网膜HO-1及VEGFm RNA相对表达量。结果（1）成功建立32只2型糖尿病大鼠模型,成模率80%。（2）DM组大鼠出现典型糖尿病症状,血糖明显增高,毛色枯黄脱落、失去光泽,精神萎靡,活动减少迟缓,且部分大鼠出现四肢红肿、溃疡形成,眼部观察到晶状体浑浊变白。tBHQ组较DM组毛发整齐而有光泽,精神状态较好,活动增加。（3）DM组大鼠较NC组大鼠血脂TG、TC、LDL-C均明显升高,HDL-C明显降低（均P<0.05）。各组间大鼠FBG比较差异有统计学意义(χ4w2=10.631,P4w=0.005;χ212w=15.053,P12w=0.001),且12w时tBHQ组大鼠血糖明显低于DM组大鼠。与NC组相比,DM组大鼠FINS、HOMA-IR显著增加,ISI显著降低,差异有统计学意义（P<0.05）。tBHQ组与DM组相比,FBG、FINS、HOMA-IR均有下降,ISI增加,但差异无统计学意义（P>0.05）。（4）4w、12w NC组大鼠视网膜各层组织结构清楚,排列整齐。4w DM组大鼠视网膜各层组织排列基本整齐,细胞间质水肿,神经节细胞空泡样变性,内、外核层排列紊乱;12w DM组大鼠视网膜各层组织排列紊乱,细胞间质水肿,神经节细胞数量减少,空泡样变性,内、外核层部分融合。与同一时间DM组相比较,tBHQ组视网膜各层组织排列基本整齐,各层细胞水肿相对较轻。（5）免疫组织化学检测结果显示,各组间HO-1蛋白表达量比较,差异有统计学意义(F4w=689.533,P4w=0.000;F12w=289.988,P12w=0.000);VEGF蛋白表达量比较,差异有统计学意义(F4w=1084.956,P4w=0.000;F12w=1107.533,P12w=0.000)。（6）荧光定量PCR结果显示视网膜中HO-1m RNA相对表达量,DM组及tBHQ组均较正常组增加,差异有统计学意义（P<0.05）。tBHQ组较DM组增加,差异有统计学意义（P<0.05）。视网膜中VEGFm RNA相对表达量,DM组及tBHQ组较NC组均增加,差异有统计学意义（P<0.05）。tBHQ组较DM组降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论（1）采用高脂高糖饲料喂养联合小剂量STZ注射可成功建立大鼠DM、DR模型,造模成功大鼠出现糖脂代谢紊乱,胰岛素抵抗,视网膜组织可见早期DR典型改变;（2）糖尿病状态下,大鼠视网膜发生氧化应激及慢性炎症反应,HO-1、VEGF表达增多;（3）tBHQ可一定程度减轻DM大鼠胰岛素抵抗和增加胰岛素敏感性,降低血糖,减轻视网膜组织病理学改变;（4）tBHQ对糖尿病大鼠胰岛功能及视网膜组织的保护可能是通过诱导激活HO-1的表达,发挥抗氧化、抗炎性损伤等作用,一定程度下调VEGF的表达,保护糖尿病大鼠视网膜组织。