银杏叶扶芳藤合剂对急性脑缺血再灌注后c-Fos与TNF-α表达的影响

来源 :广西中医学院 广西中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:posedong
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目的:   研究银杏叶扶芳藤合剂对急性脑缺血再灌注后c-Fos及TNF-α表达的影响,初步探索银杏叶扶芳藤合剂对脑细胞的保护作用,并对其抗脑细胞损伤作用进行评价并探讨其作用机理,为银杏叶扶芳藤合剂在治疗脑血管疾病方面的开发利用提供理论依据。   方法:   1.药物的准备:主要药物为中药扶芳藤与银杏叶。购买成熟期的银杏叶3.6kg、扶芳藤0.4kg,按中药炮制方法制成制剂,水煮后以95%的酒精进行萃取,回收酒精后浓缩成2g/ml置4℃冰箱备用。   2.急性毒性实验,获取银杏叶扶芳藤合剂的最大耐受量。   3.动物准备:取Wistar大鼠136只,体重在250~300g间,随机分为用药组与对照组以及假手术组三个组别,对用药组大鼠灌药2个月,给药剂量为20g/kg,制作动物模型。   4.动物模型的准备及处理:参照Zealongas的造模方法,采用插入线栓闭塞大鼠大脑中动脉的方法建立急性大脑缺血模型,并在缺血2h后进行再灌注2h、6h、12h、24h。再次麻醉大鼠后,暴露心脏,剪开心尖,用生理盐水冲洗血管,然后以4%多聚甲醛全面固定,取出大脑,以4%多聚甲醛固定,置30%蔗糖溶液过夜,待大脑沉入液体底部后取出冰冻切片,以检测c-Fos与TNF-α的表达。   5.急性脑缺血再灌注后c-Fos与TNF-α检测。对固定后的大脑进行冰冻切片,贴于多聚赖氨酸玻片,以免疫组化的方法检测c-Fos与TNF-α的表达量。用DAB进行染色,以确定再灌注后的神经损伤情况。结果用显微镜进行观察,分别对每个视野中的c-Fos阳性细胞和TNF-α阳性细胞进行计数。   6.统计分析。所有测量值以(x)±s表示,各组间利用PEMS3.1forWindows软件进行t检验分析,p<0.05可认为具有统计学意义。   结果:   1.银杏叶扶芳藤合剂的最大耐受量(MTD)为240g/kg。   2.c-Fos检测结果,各组样本阳性细胞百分数分别是:脑缺血再灌注2h用药组为7.57±1.72,对照组为40.29±3.04,两组间比较差异具有显著性(P<0.05);再灌注6h用药组为9.00±2.08,对照组为50.71±4.72,两组间比较差异具有显著性(P<0.05);再灌注12h用药组为7.86±1.77,对照组为43.86±5.37,两组间比较差异具有显著性(P<0.05);再灌注24h用药组为6.57±1.62,对照组为52.29±5.88,两组间比较差异具有显著性(P<0.05)。假手术组阳性细胞百分比为0。   3.TNF-α检测结果,各组样本阳性细胞数分别是:再灌注2h用药组为2.00±0.82,对照组为7.86±1.35,两组间比较差异具有显著性(P<0.05);再灌注6h用药组为2.86±0.70,对照组为17.00±2.45,两组间比较差异具有显著性(P<0.05);再灌注12h用药组为4.14±1.07,对照组为28.86±3.02,两组间比较差异具有显著性(P<0.05);再灌注24h用药组为4.71±1.50,对照组为38.71±3.64,两组间比较差异具有显著性(P<0.05)。假手术组阳性细胞百分比为0。   结论:   银杏叶扶芳藤合剂可能通过减少大鼠急性脑血再灌注时c-Fos的表达与降低TNF-α的含量,从而对大脑细胞具有良好的保护作用。
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