二神丸是《普济本事方》中记载的验方，由补骨脂和肉豆蔻组方配伍组成。方中君药补骨脂是否炮制可影响其临床疗效的发挥。传统中药炮制理论认为补骨脂生用入脾肾经，具有温肾助阳、固精缩尿、纳气、止泻之效，盐炙后可缓和其辛窜温燥之性，并可引药入肾，增强温肾补脾的功效。饮片炮制、复方入药是中医临床用药的特色，因此本课题在国家自然科学基金面上项目的支持下，结合前期的研究基础，从复方层面出发，以补骨脂“温肾止泻、缩尿”功效为切入点，多层次多角度研究补骨脂在二神丸中“盐炙入肾?温肾止泻”和“盐炙入肾?温肾缩尿”炮制增效的机理，阐明“肾司二便”的科学内涵。　　目的：　　本课题为国家自然科学基金向上项目“复方二神丸中药物炮制增效机理研究”(81274085)和国家基础科学人才培养基金项目“复方‘二神丸’中药物炮制增效物质基础研究”(J13100340)的部分研究内容。课题组在前期己建立脾肾阳虚泄泻模型并初步筛选了二神丸的药效部位（石油醚提取物）。本文在前期研究的基础上，以该有效部位为研究对象，首先利用UHPLC-QTOF-MS技术探寻盐炙前后复方提取物化学成分的差异性以及体内代谢的差异性，再对二神丸提取物止泻和缩尿作用进行验证和评价，最后通过比较补骨脂盐炙前后组成的二神丸对脾肾阳虚泄泻模型大鼠肾和肠道水液代谢探讨二神丸中补骨脂盐炙的科学性及“盐炙入肾-肾司二便”的作用机理。　　方法：　　将补骨脂盐炙前后组方二神丸，采用“文献研究—有效部位质量控制—有效部位成分群—代表成分体内代谢—作用机理”研究模式，运用超高效液相色谱-四级杆飞行时间高分辨质谱联用(UHPLC-QTOF-MS)及实时荧光定量(RT-qPCR)、免疫组织化学(IHC)等技术，多角度、多层次地探讨补骨脂在复方中炮制增效的作用机理以及“盐炙入肾—肾司二便”的科学内涵。　　1.进行系统的文献研究，整理了补骨脂盐炙的历史沿革、临床应用及现代研究进展、二神丸的研究进展和“肾司二便”的研究进展，为开展补骨脂盐炙前后组方二神丸炮制增效机理及“盐炙入肾—肾司二便”的研究提供理论支撑。　　2.对前期筛选出来的有效部位，采用综合质量评价模式，从提取物浸膏提取率、HPLC指纹图谱、土要化学成分的相对含量及GC-MS指纹图谱四个方面对二神丸石油醚提取物进行质量控制研究。　　3.对二神丸的有效部位，利用UHPLC-QTOF-MS技术分析补骨脂盐炙前后组成的二神丸提取物中的化学成分及炮制前后的差异，探讨有效部位的物质基础及炮制前后成分的异同。　　4.利用UHPLC-QTOF-MS技术，采取口服给药方式，对炮制前后的复方提取物的代表性化合物在大鼠体内的生物过程进行系统分析，对各大类成分巾的代表性成分在血浆、胆汁、尿液、粪便中的代谢产物进行推测，探寻其代谢途径及比较炮制前后体内代谢的差异。　　5.在前期研究的基础上复制脾肾阳虚泄泻(Spleen Kidney Yang Deficiency-induced diarrhea，SKYD)大鼠模型，从一般状态、肾水液代谢、肠道水液代谢、肾功能和免疫功能6个方面多指标验证二神丸提取物“温肾止泻”和“温肾缩尿”的效用性，以及阐明补骨脂盐炙后组方增效及盐炙入药的科学性。　　6.在脾肾阳虚泄泻大鼠模型的基础上，结合组织病理学技术、实时荧光定量技术和免疫组织化学技术等从肾脏水液代谢相关脏器（肾脏和肾上腺）、肾脏水液代谢相关激素以及肾脏水液代谢相关的通道、转运体三个方面多靶点多层次研究二神丸提取物温肾缩尿的作用机理，探讨二神丸中补骨脂盐炙的科学性及“盐炙入肾．肾司二便”的科学内涵。　　7.在脾肾阳虚泄泻大鼠模型的基础上，结合组织病理学技术、RT-qPCR和IHC等，从水液代谢主要肠段、肠道水液代谢相关激素以及水盐代谢相关的转运通道三个方面多靶点多层次研究止泻的作用机理，探讨二神丸中补骨脂盐炙的科学性及“盐炙入肾-肾司二便”的科学内涵。　　结果：　　1.通过UHPLC-QTOF-MS技术初步表征了炮制前后提取物中共75个成分，主要为香豆素类、黄酮类、木脂素类、苯丙素类、酚酸类、萜类和脂肪酸，其中炮制前后相对含量变化较大的成分种类主要为黄酮类、酚酸类和木脂素类。　　2.通过体内代谢实验研究，在复方提取物灌胃后大鼠的胆汁、粪便、尿液、血浆中，目前共得到原型化合物及代谢产物共51个。盐炙前、后补骨脂组方的复方提取物各类代表性成分在体内的代谢产物有一定的差异。　　3.二神丸提取物均能明显改善SKYD模型大鼠的‘般状态，明显抑制c AMP和c GMP的异常变化(P＜0.01)。并且，可显著降低24 h尿量(P＜0.01)，改善血清中钠离子和钾离子异常变化（P＜O.01），改善肾和肾上腺脏器指数(P＜0.01～0.05)，明显改善血浆白蛋白浓度(P＜0.01)，验证了复方提取物“温肾缩尿”的药效作用。同时，提取物能延长腹泻潜伏期(P＜0.01)，明显降低湿便数量(P＜0.01)及湿便率(P＜0.01)，同时还能明显降低粪便含水量(P＜0.01)和改善粪便的性状(P＜0.01)，降低血清肌酐、尿素氮(P＜0.01)和升高尿液中肌酐、尿素氮(P＜0.01)，验证了复方提取物“温肾止泻”的药效作用。另外，复方提取物还能改善胸腺指数和脾指数(P＜0.01)，升高血浆IL-2和Ig-G含量（P＜O.01），提高机体的免疫力。且盐炙后各项指标有不同程度地增加，其中以体重、cAMP/cGMP、粪便含水量等指标与生品具有统计学差异(P＜0.01～0.05)，综合来看，二神丸中补骨脂盐炙后整体作用有增强的趋势。　　4.二神丸提取物能明显改善肾和肾上腺的脏器指数(P＜0.01)及组织病理学改变，抑制ALD、AVP、CORT及ANP异常变化(P＜0.01～0.05)，上调肾阳虚多尿模型SKYD模型大鼠肾脏AQP 2、AVPR-V2、NHE 3 mRNA和蛋白的表达(P＜0.01)，以改善肾脏水液代谢紊乱。综合来看，补骨脂盐炙后组成的二神丸提取物整体作用有增强趋势，从肾脏水液代谢的角度阐明二神丸中补骨脂炮制增效作用机理和“肾司二便”科学内涵。　　5.二神丸提取物能明显改善SKYD模型大鼠空肠和回肠的组织病理学改变，抑制血浆及肠道组织中VIP及NPY异常变化(P＜0.01～0.05)，上调空肠和回肠AQP3、AQP 4及NHE 3 mRNA和蛋白的表达(P＜0.01～0.05)，上调结肠AQP 2、AQP4及NHE 3 mRNA和蛋白的表达(P＜0.01～0.05)，以改善肠道水液代谢紊乱。综合来看，补骨脂盐炙后组成的二神丸提取物整体作用有增强趋势，从肠道水液代谢的角度阐明二神丸中补骨脂炮制增效作用机理和“肾司二便”科学内涵。　　结论：　　补骨脂盐炙前后组方的提取物在化学成分种类及化学成分的相对含量均有一定的差异，且各种成分的变化规律各不相同，炮制前后复方中含量变化较大的成分种类主要为黄酮类、酚酸类和木脂素类，而补骨脂盐炙前后组方的提取物在正常大鼠体内代谢过程研究表明，炮制前、后补骨脂组方的提取物中各类代表成分在体内的代谢发生了质的变化，代谢产物有‘定的差异，代谢过程具有一定的差异，结合前期研究结果，推测可能是由于盐炙对补骨脂组方提取物中各类成分的组成比例发生变化，或成分间的变化发生相互影响，进而导致各类成分的代谢差异，说明盐炙前后的复方提取物存在一定的物质基础差异，导致体内的代谢过程具有差异性，进而可能造成药效作用差异。　　补骨脂盐炙前后组方的二神丸提取物可通过改善肾脏和肾上腺的病理变化，抑制血浆中ADH、ALD、CORT和ANP含量的异常变化以及改善肾脏NHE 3、AQP2及AVPR-V2的表达，调节肾的功能及机体水液代谢，日．盐炙后对各项指标有不同程度地增强，增强了肾脏对水液代谢的调节作用，即“盐炙入肾”，佐证了传统炮制理论“盐炙入肾”的合理性，从复方角度阐述了“盐炙入肾，温肾缩尿”炮制增效机制，从肾脏水液代谢角度阐明了“盐炙入肾一肾司二便”科学内涵。　　补骨脂盐炙前后组方的二神丸提取物可通过改善空肠和同肠的病理变化，抑制血浆、肠组织中VIP和NPY含量的异常变化，调节空肠、回肠NHE 3、AQP3及AQP4的基因和蛋白表达，以及调节结肠NHE 3、AQP2及AQP4的表达，以改善肠道水液代谢紊乱，且盐炙后对各指标有不同程度地增强，佐证了传统炮制理论的“盐炙入肾”合理性，从复方角度阐述了“盐炙入肾，温肾止泻”炮制增效机制，从肠道水液代谢角度阐明了“盐炙入肾—肾司二便”科学内涵。