【摘 要】
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该研究对四个鸽痘病毒分离株PPVY、PPVD、PPVZ和PPVX(强毒株PPVY由广东地区分离;弱毒株PPVD、PPVZ和PPVX是该实验室从广东地区分离致弱的一鸽痘病毒株,经挑斑传代而获得的)、鸡
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该研究对四个鸽痘病毒分离株PPVY、PPVD、PPVZ和PPVX(强毒株PPVY由广东地区分离;弱毒株PPVD、PPVZ和PPVX是该实验室从广东地区分离致弱的一鸽痘病毒株,经挑斑传代而获得的)、鸡痘病毒疫苗株VVJ和鸽痘病毒疫苗株VVG,进行了非必需基因TK基因(包括侧翼的15和13区)的分离、克隆、基因序列测定及比较分析,并利用PPVZ TK基因为非必需区,利用痘苗病毒启动子P7.5初步构建了鸽痘毒插入载体.通过PCR方法用自行设计的一对引物H1+H2-扩增出了四个鸽痘病毒分离株、鸡痘病毒疫苗株和鸽痘病毒疫苗株的TK基因片段,长度约为1.36Kb.对六个禽痘病毒株的TK基因用限制性内切酶NcoI进行酶切鉴定,结果酶切后均产生两条条带,一条约628bp,另一条约723bp.NcoI酶切鉴定结果与实验预期结果一致,初步证明已获得了六个禽痘病毒株的TK基因.分别将六个禽痘病毒株的TK基因克隆到pGEM-T Easy载体中,构建了相应的重组质粒,并经过酶切和PCR鉴定后进行测序.将六个禽痘病毒株(PPVY、PPVD、PPVZ、PPVX、VVG和VVJ)的TK基因序列与已公开发表的FPV TK基因序列进行比较分析.
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