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目的:通过建立体外病毒性心肌炎(VMC)细胞模型,研究益心康作用于体外感染柯萨奇B3病毒的心肌细胞,对细胞搏动、形态、酶学及生物细胞因子的影响,为中药复方益心康的进一步临床应用奠定基础。
方法:采用消化法培养原代乳鼠心肌细胞,镜下观察心肌细胞形态及搏动次数;在细胞水平测定病毒滴度以及益心康的最大无毒剂量;以CVB3感染心肌细胞建立病毒性心肌炎细胞模型;分组给予利巴韦林、中药、中药混合地塞米松药物,用Elisa法测定各实验组心肌细胞的心肌酶AST、LDH的水平;用RT-PCR法测定各实验组心肌细胞中的柯萨奇病毒基因表达水平、肿瘤坏死因子(TNF-α)和转化生长因子(TGF-β)水平。
实验结果:镜下观察各组细胞感染病毒并给药48小时后的细胞搏动,形态及病变情况表明,组间有统计学差异,多重比较示,益心康组细胞的搏动明显增多,细胞病变轻于病毒组及利巴韦林组,有统计学差异。
Elisa实验测定各组细胞给药48小时后的酶学水平数值表示,组间有统计学差异。多重比较示,益心康组细胞给药48小时后的酶学水平(AST、LDH)较病毒组和利巴韦林组显著降低,有统计学差异。益心康组细胞和益心康混合地塞米松组细胞给药48小时后的酶学水平相比无统计学差异。
PCR实验的数据表明各组细胞中的病毒复制水平及细胞因子(TNF-α、TGFβ)组间比较有组间有统计学差异。多重比较示,益心康组细胞益心康还可明显抑制心肌细胞内的病毒复制;并且TNF-α及TGF-的分泌明显低于病毒组,有统计学差异。益心康混合地塞米松使用与单独使用益心康的实验结果无统计学差异。
结论:
1、益心康可有效保护心肌细胞的搏动及减轻细胞病变。
2、益心康可有效抑制细胞内病毒的DNA复制;降低细胞酶学水平,降低相关细胞因子水平。
3、益心康单独使用与益心康及地塞米松合用无明显差异。