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研究背景：
卒中是神经系统常见病和多发病,也是人类疾病三大死亡原因之一,50%～70%的患者遗留有瘫痪、失语等严重后遗症,给社会和家庭带来沉重负担[1]。依据病理特性可将其分为缺血性卒中(ischemicstroke,IS)和出血性卒中,其中IS约占70%。目前研究证实,IS是一种由不同发病机制所导致的多种异质性症状组成的复杂疾病,是多种基因相互作用以及基因与环境、气候、饮食习惯共同影响的结果。单核苷酸多态性(singlenucleotidepolymorphism,SNP)与疾病的关联分析方法被广泛用于寻找多基因病的易感基因,所以IS的基因多态性研究正成为研究热点[2]。
目前研究的IS相关候选基因主要有:(1)影响脂质代谢基因和载脂蛋白基因;(2)影响动脉粥样硬化斑块形成相关基因;(3)颈动脉内膜厚度相关基因;(4)高血压相关基因;(5)血糖代谢相关基因;(6)纤溶和凝血系统相关基因,等等。因此本研究选取ALOX15基因和SAA基因这两个候选基因,采用病例-对照的研究方法,分析了上述两个热点基因四个关键多态性位点的基因型、等位基因在IS组及对照组中频率分布差异,从而探讨ALOX15基因和SAA基因多态性和中国北方汉族人群IS的相关性,为更详尽的了解IS发病的遗传机制提供分子流行病学依据,并为早期诊断IS提供更多的分子生物学指标。
研究方法：
本研究采用病例-对照研究方法,病例组来自2010年9月-2011年5月于中国医科大学附属第一医院、解放军第202医院神经内科病房住院治疗的中国北方汉族IS患者,共计396例,其中男239例,女157例,彼此无亲缘关系,年龄45-85岁,按病因不同分为大动脉粥样硬化性脑梗死组(large-arteryatherosclerosis,LAA)和小动脉闭塞组(small-arteryocclusion,SAO);对照组来自中国医科大学附属第一医院体检中心,共计360例,其中男性211例,女性149例,年龄、性别与病例组相匹配。应用聚合酶链式反应.限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)的方法检测rs7217186、rs12218位点的多态性,应用基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱法(MALDI-TOFMS)检测rs2619112、rs2468844位点的多态性。用拟合优度X2检验验证每个位点SNP基因型在抽样群体中的分布是否符合Hardy-Weinberg平衡。对于单位点的SNP数据,采用SPSS13.0统计软件X2Fishers精确概率法检验其基因型、等位基因在对照组与IS组及各亚组中的频率分布差异、风险度分析,最后结合临床资料,对相关数据进行条件Logistic回归方法排除传统混杂因素的干扰,以P＜0.05为检验水准。
研究结果：
1、所有研究对象的每个SNP基因型在抽样群体中的分布均符合Hardy-Weintberg平衡(P＞0.05),表示所选取的样本具有人群代表性适合做遗传学分析。
2、ALOX15基因多态性在对照组与LAA组中的频率分布:rs7217186位点的C等位基因频率病例组明显高于对照组(OR=1.42;95%CI1.09-1.83:P=0.008);携带CC基因型的个体发生IS的风险是TT基因型的2.00倍(95%CI1.21-3.29,P=0.007),应用条件Logistic回归校正后仍有统计学差异(OR=2.10:95%CI1.13-3.89;P=0.018)。Rs7217186位点的基因型及等位基因频率分布在两组间有显著性差异。rS2619112位点的A等位基因频率病例组明显高于对照组(OR=1.35;95%CI1.05-1.75:P=0.020);携带AA基因型的个体发生IS的风险是GG基因型的1.91倍(95%CI1.13-3.21,P=0.015),应用条件Logistic回归校正后仍有统计学差异(OR=1.46;95%CI1.06-2.77;P=0.034)。Rs2619112位点的基因型及等位基因频率分布在两组间有显著性差异。
3、SAA基因多态性在对照组与LAA组中的频率分布:rs2468844位点的G等位基因频率病例组明显高于对照组(OR=1.92;95%CI1.14-3.23;P=0.014);携带AG基因型的个体发生IS的风险是AA基因型的2.01倍(95%CI1.17-3.44,P=0.011),应用条件Logigic回归校正后无统计学差异(OR=1.54:95%CI0.80-2.96;P=0.195)。Rs2468844位点的基因型及等位基因频率分布在两组间无显著性差异。Rsl2218位点的C等位基因频率病例组明显高于对照组(OR=1.73;95%CI1.30-2.30;P=0.000);携带CC基因型的个体发生IS的风险是TT基因型的3.21倍(95%CI1.64-6.27,P=0.001),应用条件Logistic回归校正后仍有统计学差异(OR=2.34:95CI%1.02-5.33;P=0.044)。Rs12218位点的基因型及等位基因频率分布在两组间有显著性差异。
4、ALOX15基因多态性在男性病例组与对照组中的频率分布:rs7217186位点的C等位基因频率病例组明显高于对照组(OR=1.44;95%CI1.10-1.88;P=0.008);携带CC基因型的个体发生IS的风险是TT基因型的1.94倍(95%CI1.14-3.31,P=0.014),应用条件Logistic回归校正后仍有统计学差异(OR=2.35;95CI%1.25-4.42:P-0.008)。Rs7217186位点的基因型及等位基因频率分布在两组间有显著性差异。Rs2619112位点的A等位基因频率病例组明显高于对照组(OR=1.41:95%CI1.08-1.83;P=0.010);携带AA基因型的个体发生IS的风险是GG基因型的2.01倍(95%CI1.17-3.43,P=0.011),应用条件Logistic回归校正后仍有统计学差异(OR=2.18;95%CI1.14-4.18;P=0.019)。Rs2619112位点的基因型及等位基因频率分布在两组间有显著性差异。
5、SAA基因多态性在男性组与对照组中的频率分布:rs2468844位点的G等位基因频率病例组明显高于对照组(OR=1.78;95%CI1.01-3.14:P=0.047);携带AG基因型的个体发生IS的风险是AA基因型的1.85倍(95%CI1.03-3.33,P=0.040),应用条件Logistic回归校正后无统计学差异(OR=1.62;95%C10.83-3.15;P=0.156)。Rs2468844位点的基因型及等位基因频率分布在两组间无显著性差异。Rs12218位点的C等位基因频率病例组明显高于对照组(OR=1.50;95%CI1.10-2.03:P=0.010);携带CC基因型的个体发生IS的风险是TT基因型的2.52倍(95%CI1.16-5.47,P=0.020),应用条件Logistic回归校正后仍有统计学差异(OR=2.66:95%CI1.07-6.62;P=0.036)。Rs12218位点的基因型及等位基因频率分布在两组间有显著性差异。
结论：
1、ALOX15基因rs7217186位点CC基因型可能是中国北方汉族人群LAA的独立的风险因素,其风险性主要来源于C等位基因。Rs2619112位点AA基因型可能是中国北方汉族人群LAA的独立的风险因素,其风险性主要来源于A等位基因。ALOX15基因多态性与IS的相关性与动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)有关。
2、ALOX15基因rS7217186位点CC基因型可能是中国北方男性汉族人群IS的独立的风险因素,其风险性主要来源于C等位基因。Rs2619112位点AA基因型可能是中国北方男性汉族人群IS的独立的风险因素,其风险性主要来源于A等位基因。ALOX15基因多态性与IS的相关性与性别有关。
3、SAA基因rs12218位点CC基因型可能是中国北方汉族人群LAA的独立的风险因素,其风险性主要来源于C等位基因。SAA基因rs12218位点多态性与IS的相关性与性别有关。
4、SAA基因rs2468844位点多态性与IS的相关性与AS及性别无关。
5、ALOX15基因、SAA基因多态性与SAO无关。