利用磁镊研究铂类抗癌药物与DNA的相互作用

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癌症作为现代社会中人类生命健康的重大威胁,一直是生物学及医学界研究的热点。以顺铂为代表的铂类化疗医药已经在临床上使用了超过40年,是一类经典的药物。多种以顺铂为原型的衍生药物也已被合成并投入临床使用。关于铂类药物杀伤癌细胞的药理机制,在体内及体外条件下已经进行了许多研究。一般认为铂类药物的作用靶点为细胞中的DNA,药物分子与DNA通过共价相互作用形成加合物,造成DNA损伤,进而影响DNA在正常细胞生理过程中的复制与转录,甚至引发细胞凋亡。不过铂类药物与DNA相互作用的细节,还有很多尚未澄清。在本文中,使用单分子磁镊技术,从单分子层面,对铂类药物与DNA的相互作用进行更深入的探索。本文的研究内容分为两部分:奥沙利铂与双链DNA的相互作用,以及顺铂与G四联体结构的相互作用。  奥沙利铂作为一种顺铂的衍生物,目前已经投入到临床使用当中,对治疗结肠癌有很好的作用。在之前的研究中,发现铂类药物可以引起双链DNA凝聚,并提出了一个形成远程双臂加合物的定性模型对此进行解释。在本文中,运用单分子磁镊技术,研究了不同作用条件对奥沙利铂凝聚DNA的能力产生的影响。通过实验发现,施加在DNA上较小的拉力,使DNA旋转受限,或者与反铂混合,均能够加强奥沙利铂对DNA的凝聚作用。在之前提出模型的框架下对这些实验结果成功进行了解释,并进一步验证了这个模型的正确性。  端粒位于染色体末端,具有十分重要的生理功能,与细胞的复制与衰老息息相关。G四联体是一种在人类端粒序列中广泛存在的结构,可能具有重要的调控意义,也是一个潜在抗癌药物作用靶点。人们对G4与各种小分子化合物之间的作用进行了许多研究。之前有报道表明,G四联体结构富含G碱基,可以与顺铂等铂类抗癌药物发生作用并解体。在本文中,运用单分子磁镊技术,从单分子的层面研究了顺铂与G四联体相互作用的反应动力学。实验中发现顺铂与G四联体有两种作用机制:一种是可逆的结合,可以对G四联体结构起到稳定的作用;另一种是非可逆的共价结合,一旦形成就将永久破坏G四联体结构。这两种作用随环境中顺铂浓度的变化呈一种竞争的关系:当顺铂浓度比较低时,可逆结合占据优势;当顺铂浓度较高时,不可逆结合占据优势。这个结果显示了G四联体作为顺铂潜在靶点的可能性。  不同于之前常见的研究方法,本文中使用的单分子实验技术,在单个DNA分子与铂类药物反应的动力学层面获得了更多的信息。这为研究小分子与DNA相互作用提供了新的思路。
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