乙型肝炎病毒分子流行病学调查乙型肝炎病毒(HBV)感染是全球范围的重大公共卫生问题。我国是乙型肝炎高发区。按照1992年全国乙型肝炎血清流行病学调查结果普通人群HBV感染阳性率为10％推算,我国现有慢性无症状的乙型肝炎病毒携带者超过1亿,每年约30万名患者死于肝硬化、肝癌等乙肝相关疾病。 HBV基因组变异是突变的随机性和选择的有序性作用的结果,机体免疫系统和药物对HBV的选择压力与HBV基因进化及突变有关。根据HBV全基因序列异质性≥8％可将其分为A～H8种基因型,每种基因型还可分为亚型和准种。研究表明,各基因型及亚型有一定的地理和人群分布特点,且与人类活动有关；各基因型的临床转归、对抗病毒治疗的应答、耐药突变及其血清学转换规律之间具有显著差异。因此,研究HBV基因型及其基因进化规律对HBV感染的预防和控制具有十分重要的意义。研究表明,我国的HBV基因型A-D型均有分布,其中以C、B基因型为主,但相关研究均存在样本量少,区域局限,没有深入到基因亚型的研究等缺陷。我国目前缺乏对于HBV基因型分布的系统研究,这在一定程度上也制约了HBV基因型研究的发展。 目的：通过乙肝分子流行病学调查确定本地区HBV基因型及亚型的地理分布,建立一种快速灵敏、高通量的鉴定HBV基因型及亚型的方法以适合大规模流行病学调查并分析HBV基因型及亚型在肝脏疾病中的作用。 方法：通过多重PCR反应对462例肝细胞癌患者(HCC组)、234例慢性乙肝患者(CH组)和110例HBV病毒携带者(ASC组)进行HBV基因型及亚型的鉴定；并对其中采取手术切除或TACE或两者联合治疗的228例基因亚型为B2和C2的HCC患者随访观察1年。通过回顾性的分子流行病学研究共调查298例AHB患者、588例对照和572例患者家庭成员,填写调查表,抽取5ml血液样本。 结果： 1.建立了快速简便的鉴定HBV基因型及亚型的型特异引物多重PCR方法。 2.探讨HBV基因型及亚型在乙肝相关疾病中的分布规律以及在肝细胞癌(HCC)形成中的作用。 检测了中国东部地区(江苏、浙江、安徽和上海)462例HBV DNA阳性的HCC患者、234例慢性乙肝患者(CH)和425例乙肝携带者(ASC)的HBV基因型、HBV DNA拷贝量和HBeAg;462例HCC患者中,B2型62例(13.4％),C2型337例(72.9％),混合型49例(10.6％)；在HCC组和CH组内,混合型的病毒滴度高于C2型,且这两组内混合型所占的比例高于ASC组,HCC组的C2比例高于ASC组,HCC组内B2型从<30岁年龄组到50-59岁年龄组有下降趋势。通过多因素回归分析发现,年龄≥40岁、HBV DNA拷贝量≥10,000是HCC形成的独立危险因素,年龄≤50岁、B2亚型的患者比C2亚型HCC患者更容易复发。 3.上海地区AHB感染新的危险因素以及AHB慢性化与基因型的关系。 通过回顾性的分子流行病学研究共调查298例AHB患者、588例对照和572例患者家庭成员,填写调查表,抽取5ml血液样本。多因素回归分析表明侵入性治疗(AOR,3.72[95％C]2.55-5.42]),家庭内密切接触(AOR,3.05[95％CI 2.11-4.41]),美容保健(AOR,1.52[95％ CI,1.09-2.12]),无乙肝疫苗接种史(AOR,7.78[95％ CI,3.76-16.11])是AHB感染的独立危险因素。AHB患者中25例转成慢性乙肝,占8.4％。C2型AHB患者慢性化比例大于82型,B2型患者与C2型相比有更高的病毒滴度和HBeAg表达。 结论： 1.HBV基因型及亚型的多重PCR方法是一种快速、简便、准确、高通量的方法,适合大规模的流行病学调查。 2.上海及周边地区HBV基因亚型以C2型为主,B2型次之,HCC、CH及ASC人群中的基因型构成不同,通过HBV阳性的肝细胞患者、慢性乙肝患者和无症状携带者三组人群中HBV基因型及亚型的分布及临床指标的差异确定上海及周边地区HBV基因型及亚型在肝脏疾病谱中的分布,阐明了HBV混合基因型的感染发生HCC的危险性高于单一基因型；HBVB2型HCC患者的预后较差,为乙肝患者的个性化管理和治疗提供依据。 3.通过家族聚集性调查表明上海地区AHB感染的新的危险因素,与B2型相比HBV C2型AHB更容易发生慢性化,为急性乙肝的预防和控制的措施的制定提供依据。