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目的：研究ZHY水溶液及其乙醇提取物的抗肿瘤作用，初步探讨ZHY乙醇提取物诱导肿瘤细胞凋亡的机制，并就ZHY水溶液的免疫调节功能作初步研究，以提供一种新的抗肿瘤药物来源。
方法：
①ZHY水溶液及其乙醇提取物抗肿瘤作用研究：采用动物移植性肿瘤模型观察受试物对小鼠Lewis肺癌、H22肝癌、S180肉瘤生长的影响，验证ZHY水溶液及其乙醇提取物的体内抗肿瘤活性；采用MTT法、集落形成实验、生长曲线法观察ZHY乙醇提取物对多种体外培养肿瘤细胞的增殖抑制作用。
②ZHY乙醇提取物诱导Bel-7402细胞、K562细胞凋亡的研究：采用3H-TdR掺入法观察ZHY乙醇提取物对Bel-7402细胞DNA合成的影响；利用Hoechst33342荧光染色观察受试物对Bel-7402细胞、K562细胞形态的影响；采用流式细胞术观察受试物对Bel-7402和K562细胞凋亡百分比及细胞周期的影响；提取小分子DNA观察受试物对实验细胞株DNA片断形成的影响；采用免疫印迹法观察受试物对细胞中P53、Bcl-2蛋白表达的影响；采用RT PCR法观察受试物对Bel-7402细胞、K562细胞中p53、bcl-2、bcl-xl、bad、bax mRNA表达的影响。
③ZHY水溶液免疫调节活性研究：采用正常小鼠模型、环磷酰胺免疫抑制模型、肿瘤接种免疫抑制模型观察ZHY水溶液对机体免疫功能的影响。观察指标包括动物体重变化、脾指数、胸腺指数、小鼠脾淋巴细胞转化功能、外周血血清溶血素生成能力、脾淋巴细胞T细胞亚群分布及其在ConA、LPS诱导下分泌IL-2、IL-6、IFN-γ和TNF-α的能力。
结果：
⑴ZHY水溶液及其乙醇提取物的抗肿瘤活性研究。ZHY水溶液可有效抑制动物移植性肿瘤小鼠Lewis肺癌、H22肝癌、S180肉瘤的生长，并具有一定的剂量反应关系和良好的可重复性。500mg/kg ZHY水溶液连续给药10次，其肿瘤抑制率为43％～48％。
ZHY乙醇提取物对S180肉瘤生长的抑制作用与同等生药剂量的ZHY水溶液生药混悬液无明显差异，且该作用具有良好的可重复性，提示ZHY乙醇提取物中包含了ZHY水溶液主要抗肿瘤活性成分，ZHY乙醇提取物可代表ZHY水溶液生药的抗肿瘤活性。考虑到受试物的溶解度，体外实验选用ZHY乙醇提取物作为受试对象。以MTT法和集落形成法测定ZHY乙醇提取物对不同类型肿瘤细胞的杀伤或生长抑制作用，结果表明ZHY乙醇提取物可抑制多种肿瘤细胞的增殖，具有广谱抗肿瘤活性；其IC50值在20～50mg/L之间。生长曲线法测定结果表明，ZHY乙醇提取物可明显抑制Bel-7402、K562的增殖，但对达峰时间影响不明显。
⑵ZHY乙醇提取物诱导Bel-7402、K562细胞凋亡的研究。Hoechest33342荧光染色形态观察结果显示，随着受试物剂量的增高，各受试物组出现的核亮染细胞百分比增高，且细胞染色质凝聚，并逐渐断裂形成核碎片，在200、300mg/L*6h ZHY乙醇提取物组可见到明显的核断裂和凋亡小体。流式细胞术检测表明，随受试物浓度增高，凋亡细胞百分比增加，300mg/L组可见明显的凋亡峰；但是ZHY乙醇提取物对Bel-7402细胞、K562细胞的增殖周期无明显影响。小分子量DNA电泳发现在高浓度组出现典型的DNA阶梯状电泳条带。表明，ZHY乙醇提取物能有效诱导肿瘤细胞Bel-7402、K562凋亡。Western Blot试验结果表明，该受试物能上调P53蛋白表达、下调Bcl-2蛋白的表达。RT PCR试验发现受试物可促进p53、bad和bax mRNA的表达，抑制bcl-2，bcl-x1 mRNA的表达，显著下调bcl-2/bax和bcl-xl/bad的相对比值。推论调节凋亡相关基因与蛋白的表达可能是该受试物诱导细胞凋亡的途径。
⑶ZHY水溶液对机体免疫功能影响的研究。不同剂量ZHY水溶液连续给药20天对正常小鼠的体重无明显影响；随受试物剂量增加，小鼠脾指数、胸腺指数、由ConA和LPS诱导的脾淋巴细胞的转化功能、外周血血清溶血素生成能力有增加趋势，但除外周血血清溶血素生成能力与空白对照组相比具有显著性差异外，其他各组指标数据与空白对照组之间的差异不显著。ZHY水溶液可改善注射环磷酰胺所引起的小鼠胸腺指数降低、由ConA和LPS诱导的脾淋巴细胞转化能力下降、外周血血清溶血素生成能力减弱、脾淋巴细胞中CD4+T细胞的百分含量和CD4/CD8比值下降的状况，但对小鼠体重下降、脾脏肿大以及脾淋巴细胞中CD8+T细胞的百分含量降低无明显影响。ZHY水溶液可减轻肿瘤接种引起的小鼠脾脏肿大，提高肿瘤接种免疫抑制小鼠脾淋巴细胞由ConA和LPS诱导的转化和增殖能力，提高荷瘤鼠脾淋巴细胞中CD4+和CD8+细胞的百分含量，且CD8+细胞百分比增长幅度大于CD4+细胞，导致CD4/CD8比值下降。受试物可促进荷瘤小鼠脾淋巴细胞由ConA诱导的IL-2、IL-6、IFN-γ的分泌以及LPS诱导的TNF-α的分泌。但受试物对小鼠体重增长减少、胸腺指数降低状况无明显影响。
结论：以上研究结果表明，ZHY水溶液及其乙醇提取物具有一定的抗肿瘤活性。ZHY乙醇提取物抗肿瘤作用与调节凋亡相关基因p53、bad、bax、bcl-2、bcl-xl表达、诱导肿瘤细胞凋亡密切相关。ZHY水溶液具有体内免疫调节作用，可通过调节淋巴细胞活性、促进细胞因子生成、增强机体免疫功能起作用。ZHY有望成为抗肿瘤药物的新来源。该受试物抗肿瘤作用机制及有效活性成分的分离与确定尚需进一步研究。