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目的:非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic steatohepatitis, NASH)是一种遗传-环境-代谢相关性疾病,是以肝细胞弥漫性脂肪变性和炎症为特征的临床病理综合征。目前NASH的发病机制尚未完全明确,且无有效的治疗方法。现在所公认的发病机制是胰岛素抵抗第一次打击和氧化应激、脂质过氧化、炎性细胞因子释放的“二次打击”学说。初次打击使脂肪肝发生,二次打击导致脂肪肝发生炎症、坏死和纤维化。胰岛素增敏剂噻唑烷二酮类(Thiazolidinediones, TZDs)如罗格列酮(Rosiglitazone)可使过氧化酶体增殖激活受体γ(peroxisome proliferators activated receptors,PPAR-γ)活化,活化的PPAR-γ可抑制Kupffer细胞释放肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)、白介素-1(Interleukin-1, IL-1)、白介素-6(Interleukin-6, IL-6)等炎性介质而具有抗炎作用。本实验通过高脂饲料喂养建立NASH大鼠模型,并应用PPAR-γ激动剂罗格列酮给大鼠灌胃,观察PPAR-γ激动剂罗格列酮对NASH大鼠肝损伤的治疗作用及其对TNF-α表达的影响,旨在探讨该药物在NASH中可能的治疗作用及其作用机制。方法:45只雄性Wistar大鼠分为正常对照组(10只)和模型组(35只)。以高脂饲料喂养建立NASH大鼠模型,16周末,处死正常对照组大鼠2只,模型组4只,证实造模成功后,将模型组进一步分为4组:治疗对照组(模型组)(8只)、高剂量治疗组(8只)、低剂量治疗组(8只)和联合治疗组(7只)。28周末,股静脉放血处死所有动物,留取血清及肝组织进行以下项目检测:全自动生化分析仪检测各组大鼠血清总胆固醇(cholesterol, TC)、甘油三酯(triglyceride, TG)、丙氨酸氨基转氨酶(alanine transaminase, ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(aspartate transaminase, AST)水平;ELISA法测定血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)水平;肝组织用于快速冰冻切片,行SudanIV染色,观察肝细胞脂变情况;另以10%甲醛固定,常规包埋、切片,进行苏木精-伊红(HE)染色,观察肝组织的炎症、脂肪变性程度;逆转录聚合酶链反应法(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)检测肝组织TNF-αmRNA的表达。结果:1一般情况:28周末,正常对照组大鼠,食欲佳,皮毛光滑,精神状态好,体重增加。模型组大鼠精神萎靡,活动减少,食欲减退,消瘦,皮毛欠光泽,体重较前有所下降。治疗组大鼠精神、食欲及活动介于正常对照组与模型组之间。2生化指标检测:NASH模型组TC(2.95±0.32mmol/L)、TG(0.88±0.17mmol/L)、ALT(96.63±14.16U/L)、AST (156.13±14.74U/L)明显升高,高剂量治疗组、低剂量治疗组和联合治疗组血清TC(2.03±0.21mmol/L, 2.49±0.31mmol/L, 2.00±0.24mmol/L)、TG(0.54±0.14mmol/L, 0.71±0.14mmol/L, 0.52±0.14 mmol/L)、ALT(67.38±13.68U/L, 82.38±12.01U /L, 45.14±12.05U/L)、AST(94.25±15.70U/L, 129.5±16.70U/L,91.00±16.31U/L)均低于模型组,且高剂量治疗组血脂、转氨酶低于低剂量治疗组,联合治疗组血脂、转氨酶下降最明显。3肝脏组织学改变:肉眼观察,正常大鼠肝脏呈红褐色,明亮有光泽。模型组大鼠肝脏体积明显增大,边缘圆钝,呈浅黄色或土黄色,与周围组织有粘连,可见局灶性黄白色变性灶,切面油腻,无光泽。光镜下,正常大鼠肝细胞索以肝小叶中央静脉为中心呈放射状排列。SudanⅣ染色肝细胞胞浆中无红染颗粒。模型组胞浆内充满大量脂肪空泡,出现肝细胞脂肪变性、气球样变,可见小叶内有点状或灶性坏死,坏死肝细胞周围有炎性细胞浸润。高剂量治疗组、低剂量治疗组及联合治疗组肝细胞亦有轻度细胞肿胀,小叶结构基本正常,但肝细胞变性及炎性细胞浸润程度明显减轻。4 ELISA法检测血清TNF-α水平:模型组血清TNF-α水平(48.231±3.381pg/ml)明显升高;高剂量治疗组、低剂量治疗组及联合治疗组血清TNF-α水平分别是(38.660±3.543 pg/ml)、(43.211±3.775pg/ml)、(32.024±3.804 pg/ml),明显低于模型组(P均<0.01);高剂量治疗组血清TNF-α水平低于低剂量治疗组(P<0.05);联合治疗组血清TNF-α水平下降最明显(P<0.01)。5 RT-PCR法检测肝组织TNF-αmRNA的表达:正常对照组肝组织TNF-αmRNA表达量(0.224±0.057)很少;模型组肝组织TNF-αmRNA表达(0.954±0.063)显著增强;高剂量治疗组、低剂量治疗组及联合治疗组肝组织TNF-αmRNA表达分别是(0.714±0.059)、(0.851±0.056)、(0.424±0.057),均明显低于模型组(P均<0.01),且高剂量治疗组表达低于低剂量治疗组(P<0.01),联合治疗组肝组织TNF-αmRNA表达明显低于低剂量治疗组(P<0.01)。结论:1采用高脂饲料喂养的方法成功复制了NASH大鼠模型。2高脂血症破坏肝脏脂质代谢稳态,激活氧化应激,促进细胞因子释放。3以TNF-α为代表的细胞因子参与了NASH的肝损伤。4 PPAR-γ激动剂下调TNF-α表达,有效控制了炎症,为应用罗格列酮治疗NASH提供了理论基础。