【摘 要】
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论文探讨了钝顶螺旋藻(Spirulina platensis)对硒(Selenium)的富集、含硒藻蓝蛋白的纯化、结晶及其X射线衍射研究,主要结论如下:1、采用正交组合设计,对富硒螺旋藻培养过程中
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论文探讨了钝顶螺旋藻(Spirulina platensis)对硒(Selenium)的富集、含硒藻蓝蛋白的纯化、结晶及其X射线衍射研究,主要结论如下:1、采用正交组合设计,对富硒螺旋藻培养过程中的三种主要因素亚硒酸钠浓度、加样次数、藻密度的研究结果表明:此三种因素对藻体硒含量有显著影响;经相关与回归分析研究发现,藻体硒含量与蛋白质含量呈显著正相关,相关系数为r=0.6020(r<,0.01>=0.5050)藻体硒含量的一般趋势是随蛋白质含量的增加而增加.2、以富硒螺旋藻为材料,经细胞破碎,硫酸铵沈淀,再通过凝胶色谱(SephadexG-100)和离子交换色谱(DEAE纤维素-52,FPLC(MonoQ))纯化,含硒藻蓝蛋白的纯度A<,620>/A<,280>比等于5.24,最大吸收峰在620nm处.经SDS-PAGE电泳,测得藻蓝蛋白两个亚基的分子量为α=19000,β=21500.经等电聚焦分析,测得藻蓝蛋白的等电点为4.65.纯化后的藻蓝蛋白经DAN荧光分析,测得藻蓝蛋白的Se含量为96.8ug/g蛋白.3、在含硒藻蓝蛋白的纯化过程中,应用两性树脂脱盐的结果表明:201×2为基体的两性树脂特别适全于硫酸铵沉淀步骤中的脱盐,脱盐能力强,分辨率高,脱盐效率高达93﹪以上.4、纯化后的含硒藻蓝蛋白,通过应用悬滴气相扩散法,采用(NH<,4>)SO<,4>和PEG4000作沉淀剂,获得了该蛋白质晶体的两种晶型.5、晶型I晶体的衍射数据,以取自Fremylla diplosiphon的1.66A分辨率的藻蓝蛋白的晶体结构作为模型,进行分子置换法.结果表明:一个晶胞内有4个(αβ)<,6>六聚体,其中2个(αβ)<,6>六聚体之间沿OA,OB轴方向"边靠边"紧密缔合,两两"边靠边"缔合的(αβ)<,6>六聚体沿OC轴方向交错重叠即以体对角线方向紧密堆积.这种堆积方式在藻类藻胆蛋白中还是首次报道.
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