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目的:通过体外混合培养观察临床分离的阴道乳杆菌菌株对临床分离的阴道假丝酵母菌菌株生长的抑制作用,探讨阴道乳杆菌在外阴阴道假丝酵母菌感染中的作用,并为在阴道微生态水平预防、治疗外阴阴道假丝酵母菌病的复发提供一定的研究依据。
方法:从生育年龄健康妇女阴道分泌物中分离乳杆菌,从外阴阴道假丝酵母菌病(VVC)初发患者阴道分泌物中分离假丝酵母菌。将分离纯化后的阴道乳杆菌、阴道假丝酵母菌鉴定分类后,采用96 孔板混合生长抑制法,取混合生长24 小时后的菌液涂板计数,采用肉眼及菌落计数软件相结合的计数方法,观察处于生长旺盛期的乳杆菌对假丝酵母菌的生长抑制作用,实验中用MRS 液体培养基作为空白对照。采用纵向对比的方法比较不同乳杆菌对同一假丝酵母菌的生长抑制情况;同时采用横向对比的方法比较同一乳杆菌对不同假丝酵母菌抑制作用的强弱。结合乳杆菌产生H2O2 能力,观察乳杆菌抑制假丝酵母菌能力是否与其产生H2O2 能力的强弱相关。
结果:(1)从23例生育年龄健康妇女阴道分泌物中分离出3种乳杆菌:干酪乳杆菌、卷曲乳杆菌和嗜酸乳杆菌;从VVC 初发患者阴道分泌物中分离出3 种假丝酵母菌:白色假丝酵母菌、热带假丝酵母菌和克柔假丝酵母菌。(2)该混合生长抑制法实验表明:浓度为1*108CFU/mL 的干酪乳杆菌在白色假丝酵母菌菌液中孢子浓度约为250 个/mL 时对白色假丝酵母菌的生长有明显抑制作用;对热带假丝酵母菌没有表现出抑制其生长的作用;在克柔假丝酵母菌菌液中孢子浓度约为263 个/mL 时对其生长有明显抑制作用。浓度为1*108CFU/mL的卷曲乳杆菌在白色假丝酵母菌菌液中孢子浓度约为62 个/mL 时对白色假丝酵母菌的生长有明显抑制作用;在热带假丝酵母菌菌液中孢子浓度为48 个/mL 时表现出抑制其生长的作用;在克柔假丝酵母菌菌液中孢子浓度约为66 个/mL 时对克柔假丝酵母菌的生长有明显抑制作用。浓度为1*108CFU/mL 的嗜酸乳杆菌在白色假丝酵母菌菌液中孢子浓度约为250 个/mL 时对白色假丝酵母菌的生长有明显抑制作用;在热带假丝酵母菌菌液中孢子浓度为192 个/mL 时表现出抑制其生长的作用;在克柔假丝酵母菌菌液中孢子浓度约为263 个/mL 时对克柔假丝酵母菌的生长有明显抑制作用。
干酪乳杆菌生长旺盛期的菌液中H2O2 为阴性,卷曲乳杆菌生长旺盛期的菌液中H2O2 为弱阳性,嗜酸乳杆菌生长旺盛期的菌液中H2O2 为阳性。
结论:处于生长旺盛期的嗜酸乳杆菌对各种假丝酵母菌抑制能力均优于生长旺盛期的卷曲乳杆菌。同生长旺盛期的干酪乳杆菌相比,生长旺盛期的嗜酸乳杆菌的唯一优势体现在对热带假丝酵母菌的抑制上。生长旺盛期的乳杆菌对假丝酵母菌的抑制可能不仅仅与产生H2O2 能力有关。