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该文选择人类中发现最早的ppGAlNAc-T2为代表,从人脑基因库中将其克隆和鉴定,并用RT-PCR和原位PCR研究它在六种细胞株和六种正常人体组织中的分布和定位,最后制备了以上14种ppGalNAc-T的基因片段,制成基因芯片,比较胃癌细胞和神经胶质瘤细胞中14种ppGalNAc-T的表达谱.该文共分三个部分.第一部分 多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶-2的基因克隆,序列鉴定及其在大肠杆菌的初步表达;从人脑基因文库中克隆出ppGalNAc-T2的可溶性部分(高尔基体腔内的茎部和催化结构域),其cDNA片段长度为1563bp(为5端第154-1716位核苷酸),以pDONR201质粒转入原核表达质粒pFASTBAC中,两个重组质粒均经线性化长度鉴定,加以克隆PCR或酶切鉴定,测得插入ppGalNAc-T2片段的长度也约1.56kb.将pDONR 201/T2重组质粒进行测序,去除终止密码后,衍生出的氨基酸序列与文献报导的ppGalNAc-T2相符.并且pFASTBAC/T2质粒可在大肠杆菌中表达出59.2kDa的蛋白质产物,其分子量与520个氨基酸序列计算的结果相同.第二部分 多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶-2在不同细胞和组织中的表达;用RT-PCR两步及一步法分别测定了六个细胞株和六种正常人体组织中ppGalNAc-T2 mRNA的表达.第三部分 多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族表达谱的基因芯片研究;用合成的14对正、反向引物,以人结肠、脑等组织cDNA库为模板,采用PCR法制备了ppGalNAc T1~T14基因序列中编码区或3′-端非编码区(UTR)近1000个核苷酸序列的产物.再用TOPO-TA克隆法克隆至DH5 α工程菌,经筛选扩增细菌、质粒抽提、鉴定等步骤制得了14种ppGalNAc-T的cDNA片段库,用于基因芯片的点阵.