【摘 要】
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为了解广西猪群中猪流感病毒抗体水平,本调查主要采用血球凝集抑制(HI)试验和ELISA相结合的血清学方法,从广西10个市11个规模种猪场(均未进行SIV免疫)采集种公猪、后备母猪和
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为了解广西猪群中猪流感病毒抗体水平,本调查主要采用血球凝集抑制(HI)试验和ELISA相结合的血清学方法,从广西10个市11个规模种猪场(均未进行SIV免疫)采集种公猪、后备母猪和经产母猪399份血清,从小型猪场和散养户采集不同年龄阶段猪的血清291份,进行了H1和H3亚型猪流感病毒的抗体检测。用HI方法和ELISA对344份进行了检测,结果表明:HI方法检测出阳性为175份,阳性率分别为50.87%(175/344);ELISA法检测出阳性为195份,阳性率分别为56.68%(195/344);HI方法与ELISA方法的符合率达到89.74%(175/195),但两种检测方法检出率差异不显著(P>0.05);说明改良的HI试验作为检测方法,可以用于监测非免疫猪群的流感病毒感染情况。11个规模种猪场均受到不同程度的H1和H3亚型SIV感染,H1、H3和H1+H3亚型流感病毒抗体平均阳性率为60.5%、42%和21.65%;而其它小型猪场和散养户猪血清的H1、H3和H1+H3亚型流感病毒抗体阳性率相对较低,别为31.31%、34.34%、7.1%。2006至2007年,本实验同时在全区14个市130个疑似猪流感病毒(SIV)感染的发病猪采集251份组织病料(肺、脾、淋巴结)和在4个市8个猪场采集155份病料棉拭子,提取RNA,用核蛋白(NP)引物进行RT-PCR检测SIV,将检出阳性病料,结果:在251份和155份中分别检测出72份和11份为阳性。由于上述猪场的未使用SIV疫苗的免疫,因此,这些抗体只能理解是由野毒株感染产生的。这就表明目前,广西猪群中普遍受H1和H3亚型SIV感染,因此我们要严密监视流感病毒在猪群中的发展动向,防止流感的大流行。本研究同时对神经酸酶(NA)核苷酸序列设计引物,进行RT-PCR扩增NA,将扩增获得的NA基因克隆与PMD-18载体,并测序,然后将该基因插入PET32中构建原核表达载体,最后将重组质粒构建的表达载体转化感受态细胞BL21,酶切鉴定后对其序列分析。结果:扩增的SIV NA基因片段大小约1410bp,与国内外分离毒株基因核苷酸和氨基酸序列的同源性在96.1%-99.6%和96.%-99.4%之间。将克隆的重组质粒与重组质粒构建的表达载体,进行PCR和酶切鉴定后,结果说明目的该基因的克隆原核表达载体的构建成功,这为猪流感病毒防制及其疫苗的进一步了研究奠定基础。
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