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“玄府”滥觞于《黄帝内经》,金代医家刘完素及后世医家在此基础上加以创新及扩展,使中医玄府理论不断完善和成熟。从玄府入手探讨疾病的发病、转归、治疗,有助于我们从不同层次、不同维度对疾病进行再认识。本研究从玄府角度探讨痛风性关节炎的病因病机及证治。运用玄府理论阐释四神煎治疗痛风性关节炎的理论内涵,并借助网络药理学方法及动物实验探讨其作用机制,以期丰富中医理论应用范围,为中医药治疗痛风性关节炎提供新的思路与方法。1.四神煎治疗痛风性关节炎的理论研究目的:基于玄府理论探讨四神煎治疗痛风性关节炎的中医理论内涵。方法:考据玄府理论源流,对玄府相关名词进行梳理,分析玄府的生理、病理及治则治法特点,从玄府角度对痹证及痛风性关节炎的发病、发展、治疗进行分析,从而探讨四神煎治疗痛风性关节炎的中医理论内涵。结果:玄府是人体最小的结构单元与功能单位,具有流通气血津液、渗灌脏腑周身、运转神机的功能。玄府的病变分为三类:玄府闭塞、玄府不固、玄府痿痹,以玄府闭塞最为常见,治疗常用开通玄府法。开通玄府时,可配伍风药,风药调气升阳,化湿活血,引药达玄,祛玄府之郁,解玄府之闭,起到独特的增效作用。在玄府不通的病理状态下观察汗出与否是判定玄府是否开通的重要指标。人体玄府闭塞,卫阳被郁,营阴不通,汗道被阻,则无汗。经治疗后,玄府得通,气血津液运行通利,故正常汗出。痹证的发病、发展、治疗均与玄府关系密切。玄府闭塞是形成多种疾病的前提和基础,是玄府病变的根源。痛风性关节炎因玄府闭塞所致,导致本病玄府闭塞的病因即可为气血津液不足,又可为痰浊瘀血痹阻。玄府闭塞后可形成气失宣通、津失布散、血行瘀阻三种病理环节,从而出现痛风性关节炎的典型症状,肢体远端关节的红、肿、热、痛。在治疗痛风性关节炎中,须注重宣通玄府,使气血出入通畅,邪有所出。四神煎具有宣通玄府的作用,应用玄府理论可以阐释四神煎治疗痛风性关节炎的中医理论内涵。结论:玄府闭塞是痛风性关节炎的重要病机,宣通玄府为主要治法。应用玄府理论可阐释四神煎治疗痛风性关节炎的中医机制。2.四神煎治疗痛风性关节炎网络药理学分析目的:运用网络药理学方法,对四神煎治疗痛风性关节炎的潜在作用靶点进行预测,进而对其作用机制进行初步探讨。方法:1.以Gouty Arthritis为检索词在OMIM数据库中检索痛风性关节炎的疾病相关靶点;2.基于Batman-TCM数据库,分别检索四神煎中五味中药的药物相关靶点;3.将预测得到疾病和药物相关靶点映射于STRING软件中,构建Protein-Protein Interaction(PPI)蛋白质间相互作用网络,将结果导入 Cytoscape3.6.0中进行拓扑结构值计算,从而获得药物—疾病核心作用靶点并进行网状展示;4.将筛选得到的药物-疾病靶点导入DAVID分析进行生物信息学分析,富集KEGG通路,对四神煎治疗痛风性关节炎的作用机制做初步探讨。结果:1.预测得到痛风性关节炎的疾病相关基因425个,四神煎药物相关基因共467 个。2.通过设置 Degree,Closeness,Betwness centrality 大于等于相应均值,筛选得到四神煎药物-疾病核心靶标191个,相互作用3326对。3.通过通路富集分析得到四神煎治疗痛风性关节炎相关信号通路43条,排名前10位的通路包括细胞凋亡通路、Toll样受体信号通路、Ⅱ型糖尿病通路、癌症途径通路、细胞因子-细胞因子受体相互作用通路、前列腺癌通路、嘌呤代谢、胰腺癌通路、Fc epsilon RI信号通路、精氨酸和脯氨酸代谢通路。4.四神煎可以通过多种途径发挥抗炎、免疫调节作用,与炎症相关的Toll样受体信号通路基因富集较多,可作为四神煎治疗痛风性关节炎的重要作用通路。结论:四神煎可能通过调节TLR4/MyD88/NF-κB信号通路发挥治疗痛风性关节炎的作用。3.四神煎对尿酸钠诱导的大鼠痛风性关节炎抗炎作用及其机制的实验研究目的:观察四神煎对尿酸钠诱导的痛风性关节炎大鼠关节肿胀度、血清炎症因子的影响,初步探讨其对关节滑膜组织TLR4、MyD88、NF-kB-p65蛋白表达的影响和作用机制。方法:60只清洁级,雄性,Wistar大鼠应用尿酸钠晶体诱导造模,造模成功后随机分为模型组、双氯芬酸钠组(0.0135g/kg)、中药低剂量组(3.87g/kg)、中药中剂量组(11.61g/kg)、中药高剂量组(34.83g/kg),另设假手术组大鼠,每组各10只。于造模后开始灌胃给药,每天1次,共7天,模型组和假手术组给与等量生理盐水。观察大鼠一般情况;造模后大鼠4h、8h、24h、48h、72h踝关节肿胀度。7天后麻醉处死,腹主动脉取血。ELSIA方法检测血清IL-1 β、IL-6、TNF-a水平;常规生化方法检测尿酸、肝功能(ALT、AST)、肾功能(UREA、CREA)水平;Western方法检测踝关节滑膜组织TLR4、MyD88、NF-kB-p65蛋白表达情况。结果:1.中药各剂量组造模8h-72h均可显著降低痛风性关节炎大鼠踝关节肿胀度,和双氯芬酸钠组比较,四神煎起效时间相对较慢,但持续时间和疗效与双氯芬酸钠组无显著差别(P>0.05)。中药中、低剂量组疗效较好。2.病理结果表明中药各组均不同程度改善痛风性关节炎大鼠踝关节炎细胞浸润、滑膜增生、软骨细胞变性和坏死。3.中药各组均可显著降低血清中IL-1β、IL-6、TNF-α水平(P<0.01,P<0.05)。4.中药各组可不同程度抑制踝关节滑膜组织中TLR4、NF-kB-p65蛋白表达(P<0.01,P<0.05),对MyD88蛋白表达无明显影响。5.各给药组血清ALT、AST、UREA、CREA水平与假手术组相比无显著性差异(P>0.05)。结论:1.四神煎对MSU诱导的痛风性关节炎大鼠具有抗炎作用;2.四神煎治疗大鼠痛风性关节炎的作用机制可能与调控TLR4/NF-kB通路有关。