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目的：构建及鉴定结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv菌株Hsp16.3基因缺失突变株、结核分枝杆菌国际标准无毒株H37Ra菌株Hsp16.3基因缺失突变株和卡介苗菌株Hsp16.3基因缺失突变株。为进一步研究Hsp16.3基因的功能及探讨结核病的防治奠定基础。 方法：培养结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv菌株、结核分枝杆菌国际标准无毒株H37Ra菌株和卡介苗菌株，并提取结核分枝杆菌H37Rv菌株基因组DNA。以结核杆菌H37Rv菌株基因组DNA为模板，分别扩增Hsp16.3基因两侧Rv2030c基因和acg基因中663bp和684bp的两个DNA片段，分别插入到pKO质粒载体预定位点中，并经过抗生素筛选，菌液PCR鉴定、质粒PCR鉴定、双酶切鉴定及测序等鉴定，构建结核分枝杆菌Hsp16.3基因打靶载体；进一步将结核分枝杆菌Hsp16.3基因打靶载体分别电转入结核分枝杆菌H37Rv菌株、结核分枝杆菌国际标准无毒株H37Ra菌株和卡介苗菌株内，并与各菌株基因组中的Hsp16.3基因发生同源重组，筛选结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv菌株Hsp16.3基因缺失突变株、结核分枝杆菌国际标准无毒株H37Ra菌株Hsp16.3基因缺失突变株和卡介苗菌株Hsp16.3基因缺失突变株。 结果：1.分别扩增Hsp16.3基因两侧两DNA片段，经测序证实为所需目的片段。 2.将两个目的片段插入到pKO质粒载体中，构建结核分枝杆菌Hsp16.3基因打靶载体，经PCR鉴定及测序表明两目的片段已插入pKO质粒预定位点。 3.将结核分枝杆菌Hsp16.3基因打靶载体分别电转入结核分枝杆菌H37Rv菌株、结核分枝杆菌H37Ra菌株和卡介苗菌株中，经PCR、蔗糖及潮霉素筛选表明已构建出各结核杆菌菌株Hsp16.3基因缺失突变株。 结论：1.成功构建出结核分枝杆菌Hsp16.3基因打靶载体。 2.成功构建结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv菌株Hsp16.3基因缺失突变株。 3.成功构建结核分枝杆菌国际标准无毒株H37Ra菌株Hsp16.3基因缺失突变株。 4.成功构建出卡介苗菌株Hsp16.3基因缺失突变株。