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獐牙菜属植物作为著名的藏药材,在传统藏医药中占有重要地位,民间又称为藏茵陈,在我国约有80种,南北皆有分布,以西南及西北地区最为集中。近代药理研究表明该属植物具有保肝利胆、降血糖、强心、抗病毒、抗氧化等生物活性。目前关于獐牙菜属植物的化学成分报道主要集中在口山酮类、黄酮类、环烯醚萜类、三萜类、生物碱类等成份,本论文对獐牙菜属植物中研究比较少的化学成分游离脂肪酸、三萜酸、氨基酸、微量元素、多糖组成等进行了系统分析,同时还对獐牙菜属植物提取物的抗氧化与抑菌活性进行了研究。主要研究内容如下:
(1)利用柱前荧光标记HPLC-FLD-MS技术,首次采用2-(7H-二苯并[a,g]咔唑)乙基对甲苯磺酸酯(DBCETS)作为荧光标记试剂,建立了快速、高灵敏、高选择性的三萜酸检测方法。该方法可在18分钟内实现5种三萜酸的基线分离,检测限可达ng/mL,同时将该方法对9种獐牙菜样品的不同部位包括根、茎、叶、花中的三萜酸组分进行了准确定量分析。
(2)针对目前游离脂肪酸分析方法存在的不足,建立了基于新型荧光标记试剂-苯并[b]吖啶酮-5-乙基对甲苯磺酸酯的HPLC-FLD-MS分析方法,该方法在荧光检测器下的检测限与定量限分别为0.60~1.11 ng/mL和1.22~3.41 ng/mL,回收率在92.3%~104.5%之间,并首次对獐牙菜属植物中的游离脂肪酸进行了全面分析。
(3)制备了荧光试剂2-[2-(7H-二苯并[a,g]咔唑-乙氧基)]-乙基氯甲酸酯(DBCEC-Cl),建立了基于HPLC-FLD-MS技术的20种氨基酸分析方法。该方法具有较高的灵敏度,检测限在2.88~23.4 fmol之间,利用该方法对獐牙菜植物中的游离氨基酸与总氨基酸进行了准确分析。
(4)建立了基于微波消解-电感耦合等离子体,质谱(ICP-MS)的微量元素分析方法,并利用该方法对獐牙菜中的44种微量元素进行了定量分析。
(5)对獐牙菜属植物的醇提取部位进行了LC-UV-MS分析和化学表征,并对11种共有成分进行了初步鉴定,并建立了HPLC-UV指纹图谱;对苇叶獐牙菜中的水溶性成分进行了制备与表征,得到了5个化合物(四个环烯醚萜苷类化合物,一个口山酮苷类化合物)。
(6)利用标记试剂1-萘基-3-甲基-5-吡唑啉酮(NMP),结合HPLC-UV-MS技术,建立了灵敏、快速测定单糖的分析方法,并对分离的单糖衍生物进行了在线ESI/MS鉴定;并首次对獐牙菜多糖中单糖组成进行了分析。
(7)通过清除1,1-苯基-2-苦肼基自由基(DPPH)实验和清除羟基自由基实验分别考察了獐牙菜样品甲醇提取物的抗氧化活性;研究了獐牙菜提取物对五种受试菌(S.aureus、E.coli、B.subtilis、Salmonella和C.albican)的抑制作用。