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目的1、通过观察中国汉族人群中CHC患者和健康人之间KIR基因、HLA-C基因的频率变化,深入探讨中国汉族人群中KIR基因、HLA-C基因与CHC病程的相关性;2、通过观察中国汉族人群中CHC患者经规范化治疗后不同反应者的KIR基因HLA-C基因的频率变化,寻找对CHC治疗反应有影响力的基因；3、经荟萃分析(Meta-analysis)对pubmed上多个CHC治疗效果研究资料进行分析和概括,并结合本次研究结果对KIR2DL2对CHC治疗反应的影响；4、通过调节KIR2DL2基因的表达,观察其对NK细胞功能影响的特点,分析KIR2DL2影响CHC治疗反应的可能机制,为CHC治疗以及预后判断提供可能途径和新的治疗靶点。方法1.入选中国汉族人群中CHC病例通过生化指标检测ALT, ELISA检测HCV抗体,Realtime-PCR定量检测HCV RNA。ELISA检测排除入选病例HAV、HBV、HDV、 HEV、HIV、病毒感染。2.通过饱和盐析的方法从研究对象的抗凝血中提取DNA,采用序列特异性引物扩增技术(PCR—Sequence Specific Primer, PCR-SSP)对样本进行KIR和HLA-C分型,读取结果后计算基因频率,并统计分析比较中国汉族人群CHC患者和健康对照者之间的差异。3.中国汉族人群中CHC患者接受规范化治疗,即聚乙二醇干扰素-α(1.5微克/公斤体重/周)和利巴韦林(0.9g/天)。所有患者进行至少6个月治疗后按照与以前报道的病毒学标准分为两个治疗结果：持续病毒学应答(sustained virological responders,SVR)和无应答(nonresponders, NR),提取研究对象DNA,采用PCR-SSP对样本进行KIR和HLA-C分型,统计分析比较SVR和NR之间的差异。4.引入配对分析方法,将KIR2DL1与HLA-C2、KIR2DL2与HLA-C1配对,统计配对频率,比较中国汉族人群CHC患者和健康对照者之间、SVR和NR之间的差异。5.在pubmed数据库(1995.11-2013.4)中,以‘’KIR2DL2"和“HCV”为关键词搜索文献,并按照需要英文书写、与国际标准相同的CHC诊断标准和治疗方法及结果判断、PCR-SSP检测KIR基因并含有KIR2DL2频率数据,患者除HCV感染外无其他疾病等筛选条件,选出合适的文献用于Meta分析,确定文献异质性、发表偏倚,选择固定效应模型计算总体风险系数。6.使用经5-Aza-dc处理后的NK92细胞,该细胞表面可高表达KIR2DL2分子,观察不同抗体浓度抗体封闭KIR2DL2受体后,NK细胞对K562细胞的杀伤活性。7. SPSS17.0对数据进行统计分析。结果1.基因分型结果表明：KIR2DL2、KIR2DS3计算的OR值均大于1,提示在CHC患者中这两种基因的频率高于健康对照组,这可能是CHC发生的危险因素；同时,HLA-Cw*06, HLA-Cw*15, KIR2DS4计算的OR值小于1,提示在CHC患者中这些基因的频率低于健康对照组,这些基因的存在可能可以抑制CHC的发生。2.在SVR与NR患者的分型结果中,我们可以看到KIR2DL2和HLA-Cw*03计算的OR值仍然大于1,提示在治疗效果较差的CHC患者(NR)中KIR2DL2基因的频率高于SVR组,携带有该基因的CHC患者的治疗反应要弱。3. KIR/HLA-C配对分析显示,KIR2DL2+HLA-C group1配对OR值大于1,同时该组合在NR患者中的频率要高于SVR,提示在CHC中这种组合的存在可能有利于CHC的发生以及不利于CHC的治疗；KIR2DL1+HLA-C group2配对OR值小于1,提示这种组合的存在可能对抑制CHC的发生有一定作用。4. Meta分析结果同样提示KIR2DL2对CHC治疗的负面影响。5.经5-Aza-dc处理后的NK92细胞,该细胞表面可高表达KIR2DL2分子,在使用抗体浓度20μg/ml封闭KIR2DL2受体后,NK细胞对K562细胞的杀伤活性明显增强。结论1.KIR2DL2可以抑制NK细胞活性；2. KIR2DL2和它的受体HLA-C groupl可能有利于中国汉族人群中CHC的发生以及对PeglFN-a与利巴韦林联合治疗的反应不佳；3. KIR2DS3在中国汉族人群CHC患者中的频率高于健康对照组,这可能是中国汉族人群中CHC发生的危险因素；4. HLA-Cw*06, HLA-Cw*15, KIR2DS4CHC患者中的频率低于健康对照组,这些基因的存在可能可以抑制CHC的发生。本研究的创新点1.目前,在高加索人群中有关于KIR与CHC相关性的报道,但在中国汉族人群中未见相关报道,本研究主要通过PCR-SSP检测中国汉族人群CHC患者中KIR频率与疾病以及治疗的相关性。2.通过研究结果及Meta分析,首次提出在中国汉族人群中KIR2DL2为CHC发生以及治疗的负面因子。本研究的意义1.通过研究,发现在中国汉族人群中KIR2DL2的存在具有较强的NK细胞抑制能力,使得KIR2DL2的存在可能不利于HCV的清除,导致HCV感染规范化治疗效果差,进而有利于HCV持续性感染发生。2. K1R2DL2可成为一种HCV治疗效果预判指标,也是中国汉族人群中CHC发生流行病学危险因素,在后期研究中,KIR2DL2可成为免疫治疗CHC的重要靶点。