鸭疫里默氏杆菌(Riemerella antipestifer, RA)能引起鸭、鹅、火鸡等多种禽类发生鸭疫里默氏杆菌感染,呈急性或慢性败血性经过。本研究对RA OmpA基因开展了生物信息学分析、克隆表达、蛋白纯化、多克隆抗体制备、基于OmpA蛋白间接ELISA方法的建立、重组蛋白免疫原性等研究,主要结果如下：1 RA OmpA基因的生物信息学分析RA OmpA全基因长1208bp,由397个氨基酸编码大小为43.52kDa的蛋白,等电点(pI)为4.81。该蛋白没有信号肽切割位点和跨膜区,有如下功能位点：有4个N-糖基化位点,9个蛋白激酶C磷酸化位点,7个酪蛋白激酶II磷酸化位点,3个N-豆蔻酰化位点。亚细胞定位分析该蛋白主要分布于外膜和细胞之内。氨基酸进化树分析表明该蛋白与黄杆菌科编码OmpA蛋白的其它成员相似性低。该蛋白的抗原性分析表明第185-337位这段氨基酸有连续而且强烈的抗原性。2 RA OmpA基因的克隆表达和多抗的制备对RA OmpA基因设计了一对引物,大小为1208bp,构建pJET1.2/OmpA克隆载体及其pET32a(+)OmpA表达载体,转入表达菌株BL21内进行原核表达,优化的表达条件：在37℃,IPTG终浓度为0.4mmol/L诱导4h的最优条件下重组蛋白能够大量表达。经SDS-PAGE分析蛋白大小约63kDa,并主要以可溶性形式表达于上清,并用切胶的方法纯化该蛋白。纯化的蛋白用兔抗RA ATCC菌为一抗,HRP-抗兔为二抗经Western blot证实,该蛋白具有较好的反应原性。最后,将纯化的蛋白制备兔抗多克隆抗血清,用琼扩的方法测定效价为1：16。3基于 OmpA蛋白间接E L1 SA方法的建立用纯化的重组蛋白作为包被抗原,用鸭抗RA ATCC全菌血清作为一抗,HRP-羊抗鸭为二抗进行条件的优化,最后结果为,当包被的浓度为3.6125μg/mL;一抗最佳稀释度为1：100,最佳反应时间为1.5h；二抗最佳稀释度1：400,最佳反应时间为2h；用1%BSA为封闭液；底物作用时间为30min时的反应条件最佳；并用优化好的条件对26份阴性血清做了阴阳性临界值确定,根据公式,当OD450>0.379时可判为阳性,当OD450≤0.294时可判为阴性；重复性试验结果表明变异系数均小于11%,表明该方法具有较好的重复性；对其它5种常见鸭病的阳性血清均无交叉反应性,说明具有较好的特异性。4重组蛋白免疫原性的研究用纯化的重组蛋白作为免疫原,对雏鸭进行免疫,实验分组：OmpA蛋白组、OmpA蛋白加佐剂组和阴性组。对体液免疫和细胞免疫进行监测,结果表明,所有的结果在二免后都具有显著的升高,而且二免后OmpA蛋白组、OmpA蛋白加佐剂组测得的结果具有较显著的差异。说明仅有OmpA单独作为抗原还是不能引起较强的免疫反应性。