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鸡枞菌是一种味道鲜美、营养丰富的珍稀野生食药用菌,其子实体中有丰富的脑苷脂类物质,特别是脑苷脂A和B有显著的镇痛作用和脑神经保护作用,在未来有成药的巨大潜力。但是由于鸡枞菌与白蚁共生,其子实体仅能在白蚁巢上生长,至今还没有实现鸡枞菌子实体人工培养的产业化。本文旨在培育出生长能力强、脑苷脂A和B含量高的鸡枞菌菌株,确定其最佳液体培养条件。主要研究内容包括:①产脑苷脂鸡枞菌菌种的培育及鉴定;②菌丝体液体培养条件的优化;③外源丝氨酸在鸡枞菌脑苷脂生物合成中的作用。得到的结论如下: (1)以野生鸡枞菌子实体为原料,通过组织分离、纯化和筛选,培育一株生长能力强、脑苷脂A和B含量高的菌株CTM-1。分子生物学鉴定结果表明,菌株CTM-1及其出发野生子实体与盾尖鸡枞菌(Termitomyces clypeatus)的同源性为99%。 (2)葡萄糖、蛋白胨、温度和pH对鸡枞菌CTM-1液体培养的生物量有较大影响。鸡枞菌CTM-1的最佳培养基组分为:葡萄糖27 g/L、蛋白胨11g/L、硫酸镁0.75 g/L、磷酸二氢钾1.5 g/L、VB10.05 g/L、VB60.05 g/L、pH5.6。在28℃,150 rpm的条件下,采用该培养基进行鸡枞菌CTM-1的液体培养,7d后的生物量为5.08 g/L。 (3)在采用添加丝氨酸的培养基进行的鸡枞菌CTM-1液体培养中,菌丝体脑苷脂A含量在培养基中丝氨酸添加量为0.50 g/L时达到最大值0.272%,菌丝体脑苷脂B含量在培养基中丝氨酸添加量为0.25 g/L时达到最大值0.080%。向培养基中添加丝氨酸的时间以培养开始前最为有效。但是,生物量随培养基中丝氨酸添加量的增加略有降低。 (4)在采用以丝氨酸替换蛋白胨的培养基进行的鸡枞菌CTM-1液体培养中,菌丝体脑苷脂A含量在丝氨酸使用量为0.75 g/L时达到最大值0.284%,菌丝体脑苷脂B含量在丝氨酸使用量为1.00 g/L时达到最大值0.099%。但是,生物量随培养基中丝氨酸使用量的增加略有降低。 (5)鸡枞菌CTM-1在普通培养基和富丝氨酸培养基中的生长基本一致。0~2d为延滞期,3~7 d为对数期,7d以后为稳定期。菌丝体脑苷脂含量在3~7 d培养期内随培养时间大幅增加,在7~10d培养期间内增加速度逐渐减慢。培养10d时,普通培养基和富丝氨酸培养基的菌丝体脑苷脂A含量分别为0.186%、0.245%,菌丝体脑苷脂B含量分别为0.085%、0.103%。采用富丝氨酸培养基,可增加菌丝体中脑苷脂的含量。 (6)菌丝体丝氨酸含量在5~7 d培养期内随时间缓慢增加,7~10 d培养期内保持稳定。培养10d时,普通培养基的菌丝体丝氨酸含量为1.37%,富丝氨酸培养基的菌丝体丝氨酸含量为3.52%,是普通培养基的菌丝体丝氨酸含量的2.6倍。 (7)富丝氨酸培养基中的丝氨酸和其他氨基酸都得到了充分利用。培养基中丝氨酸消耗量的增加与菌丝体中丝氨酸和脑苷脂含量的增加成正相关,表明外源丝氨酸参与了鸡枞菌的代谢途径。