HLA—G1转染猪内皮细胞降低异种细胞排斥反应的研究

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目的:人类白细胞抗原G1(human leukocyte antigen-G1,HLA-G1)是近来研究降低异种移植细胞排斥反应较为关注的课题.HLA-G1主要通过与杀伤性T淋巴细胞(CTL)和自然杀伤细胞(NK)的抑制性受体结合来抑制由上述细胞介导的溶细胞作用.而猪源性器官最有可能替代人体器官进行器官移植,所以采用猪的内皮细胞作为研究的材料.该实验将HLA-G1转染猪内皮细胞系细胞(porcine endothelial cell,PEC),观察转染后的PEC对人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)和NK92细胞介导的杀伤作用的影响,以期从细胞排斥方面降低人接受猪源性器官后的异种细胞排斥反应.方法:利用脂质体包裹的方法,将携带HLA-G1基因的真核表达载体pcDNA3.0转染猪内皮细胞系细胞(porcine endothelial cell,PEC),在蛋白质水平通过间接免疫荧光,观测HLA-G1在PEC膜上有无表达;并在RNA水平通过特异性引物进行RT-PCR,以凝胶电泳来检测有无特异性条带来证实HLA-G1的表达.如有表达,则以外周血单个核细胞和NK细胞系(NK92)细胞作为效应细胞,在不同的效靶比之下,利用<'51>Cr释放试验来检测NK细胞对于转染或未转染HLA-G1的PEC杀伤作用的改变.结论:HLA-G1可成功的转染至PEC上,转染后的PEC能够有效地降低由人NK细胞介导的对猪内皮细胞的杀伤作用,说明HLA-G1可以降低人NK细胞对猪源性细胞的异种细胞排斥反应,从而为抑制异种细胞排斥反应提供了新的思路.
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