盾壳霉CmMPK1基因在产孢和寄生中的功能验证

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盾壳霉是核盘菌的生防真菌,在菌核病的生物防治中起到十分重要的作用。目前已有报道与盾壳霉产孢功能和寄生功能相关的基因及其作用机理,但鉴于盾壳霉产孢和寄生过程的复杂性以及商业化生产对盾壳霉分生孢子的需求,开展对盾壳霉产孢调控网络的研究是必须的。本课题利用分子生物学技术克隆到盾壳霉CmMPK1基因,并验证了CmMPK1的功能。  本研究主要内容包括:⑴克隆了盾壳霉CmMPK1基因。该基因含有5个外显子,编码384个氨基酸的激酶蛋白,含有一个S-TKc保守结构域,属于PKc超家族。进化分析发现CmMPK1与构巢曲霉(Aspergillus nidulans)MPKB、畸形外囊菌(Taphrina deformans)的MPKB、布氏白粉菌(Blumeria graminis)MAP1和酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)FUS3蛋白聚为一簇,属于MAPK级联途径FUS3/KSS1支路中MAPK类基因。在盾壳霉中CmMPK1在孢子形成阶段表达量显著高于菌丝生长阶段表达量。⑵CmMPK1基因影响盾壳霉产孢、黑色素形成以及寄生菌核能力。通过基因敲除和互补技术,获得了CmMPK1基因的敲除转化子和互补转化子。敲除转化子不能产生分生孢子及分生孢子器,寄生能力减弱,生物学产量增加,互补转化子可恢复以上表型缺陷。另外CmMPK1敲除转化子耐受0.1 mol/L-0.6 mol/L浓度钙离子,菌丝中ROS升高,对多菌灵敏感,这可能与盾壳霉钙离子信号通路应答、活性氧调节和微管蛋白的调控有关。⑶在CmMPK1敲除转化子中,CmNOX1(NADPH氧化酶相关蛋白)、CmHOG1(高渗应激蛋白激酶)、CmSLT2(细胞壁完整性蛋白激酶)和CmAMN1(有丝分裂相关蛋白)表达下调,但并不存在直接互作,初步表明FUS3/KSS1-MAPK交配相关通路、CWI-MAPK细胞壁完整性相关通路和HOG-MAPK高渗胁迫相关通路在盾壳霉分生孢子及菌核寄生调控过程中的作用可能很复杂,还需要进一步的研究。
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