C2cd4d基因在大鼠早期发育睾丸组织中的表达

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目的:精子发生是精原干细胞自我更新和高度分化的一系列复杂过程。此过程涉及到数以千计的基因通过程序化的表达在特定阶段编码蛋白而完成,并发挥特定功能。因此,特定基因独特的时空表达模式在调节精原干细胞早期发育及自我更新和分化过程中起着非常关键的作用。本课题通过研究C2cd4d基因在大鼠早期发育睾丸组织中的表达情况,探讨C2cd4d基因与精子发生可能存在的关联。  方法:(1)采用石蜡切片免疫荧光组织化学方法检测65日龄大鼠睾丸组织中C2cd4d(Them5)的蛋白表达;(2)通过饲养2、4、6、8、10、12、14、15、16、20、25、29、30、31、35、40、45、50、55、60、65日龄的Wistar雄性大鼠。采用Real-time PCR技术检测大鼠早期发育睾丸组织中C2cd4d基因的mRNA在不同时间点的转录表达。  结果:成功提取2-65日龄的雄性Wistar大鼠睾丸组织RNA和总蛋白。将RNA反转成cDNA,做Real-time PCR,观察了不同时间点的C2cd4d基因的转录表达。在mRNA水平中,观察C2cd4d基因在大鼠早期发育睾丸组织中的转录的表达情况:大鼠出生后2-65天mRNA表达模式呈波浪式变化,出生后第2天开始逐渐上升,到第6天达到相对高值,直到第8天数值变低。从第10天开始迅速线性上升,12天,16天达到最高值,然后开始逐渐下降,直到第30天下降到最低值。30天之后开始缓慢上升,上升到第55、60天达到相对高值又开始下降,第65天达到相对低值。其中6、12、16、55、60日龄大鼠睾丸组织mRNA表达有显著增加。其中12、16日龄大鼠睾丸组织mRNA表达最高。在蛋白水平中,荧光免疫组化结果显示C2cd4d基因在大鼠早期发育睾丸组织中的所有细胞都表达,但在接近管腔的成熟精子细胞和管腔与边缘的中间处的精母细胞表达居多。  结论:C2cd4d基因表达与精子发生有相关性,C2cd4d基因在大鼠早期发育睾丸组织中一直有表达,主要表达于精原干细胞的增殖,减数分裂尤其是第一次减数分裂及成熟精子生成过程。可能参与精原干细胞有丝分裂的增殖,减数分裂中DNA、RNA的合成及成熟精子的生成过程。
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