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本研究采用BacillussubtilisWB600(pMA5)来表达产碱杆菌PGA。—系列的分批、补料分批发酵实验表明葡萄糖对于PGA的产生有阻遏作用,不适于用作WB600(pMA5)发酵的碳源,而淀粉被利用较慢,不产生有阻遏作用的代谢副产物,是比较优良的碳源。
本文以25g/l可溶性淀粉为碳源分批发酵,PGA活性为378u/l,平均生产率为7.13u/l·h。由于淀粉的溶解性和流动性较差,难以用于流加实验。用适量α-淀粉酶将玉米淀粉部分水解后,其流动性差的问题得到了很好的解决。
本文用部分水解的玉米淀粉来流加进行发酵,PGA的产量达到546u/l。通过恒pH法流加玉米淀粉水解液和tryptone的混合物,最终酶活达到1960u/l是分批培养的5倍多;PGA平均生产速率达到了20u/l·h,是分批培养的将近3倍,揭示了提高了生产效率的效果。