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目的:研究中医经典补肾方“左、右归丸”含药血清对SD大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)在不同时间成骨分化的影响，通过在显微电镜下进行细胞形态学观察、流式细胞鉴定(FCM)、实时荧光定量(PCR)、甲基化特异性PCR(MSP)等核心实验技术，观察出补肾方剂左归丸、右归丸含药血清7d时间对骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化的影响、成骨基因Osterix（成骨细胞特异性转录因子）和oc（骨钙素基因）表达及甲基化的水平。从实验的角度证明补肾经典方剂“左、右归丸”的补肾作用，为中药及成方提供科学的实验研究。 方法:以3周龄(40g±5g)的SD大鼠双后肢骨髓间充质干细胞(BMSCs)为实验对象。在无菌条件下进行SD大鼠股骨及胫骨的切取并提取骨髓，进行SD大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的分离培养、传代、纯化，在通过CD29、CD34、CD45、CD90等抗体进行流式细胞鉴定(FCM);选择12周龄的SD大鼠为实验对象，按原方剂标准量熬制左归丸、右归丸药液，按人和动物体表面积折算的等效剂量每日两次喂养SD大鼠连续3d，抽取其腹主动脉血液后离心制备左归丸、右归丸含药血清;实验分为两个观察组:实验1组:正常对照组、左归丸含药血清组、成骨诱导液组;实验2组:正常对照组、右归丸含药血清组、成骨诱导液组;用osterix和oc为靶基因，检测7d后的基因表达和其甲基化水平的变化规律。应用Real time RT-PCR检测osterix、oc成骨基因的表达情况。采用甲基化特异性PCR法检测osterix、oc基因启动子区域甲基化状态。 结果:(1)通过流式细胞鉴定(FCM)技术对体外分离培养的骨髓间充质干细胞(BMSCs)进行检测，体外培养的细胞符合骨髓间充质干细胞(BMSCs)特性，证明了所研究的细胞为骨髓间充质干细胞(BMSCs)。(2)在成骨诱导环境中，含药血清干预7天后，经Real time RT-PCR检测，结果为:实验A组:左归丸组诱导osterix基因的表达明显高于正常对照组、成骨诱导液组，组间比较差异明显(P＜0.05)。左归丸组诱导的OC基因的表达明显高于正常对照组、成骨诱导液组，组间比较差异明显(P＜0.05)。实验B组:右归丸组诱导osterix基因的表达明显高于正常对照组、成骨诱导液组，组间比较差异明显(P＜0.05)。右归丸组诱导的OC基因的表达明显高于正常对照组、成骨诱导液组，组间比较差异明显(P＜0.05)。(3)在成骨诱导环境中，含药血清干预7天后，经甲基化特异性PCR检测，结果为:左归丸组、右归丸组osterix基因甲基化率明显低于成骨诱导液组、实验对照组，组间比较差异明显(P＜0.05)。osterix基因甲基化程度依次为右归丸组＜左归丸组＜成骨诱导液组＜正常对照组。左归丸组、右归丸组OC基因甲基化率明显低于成骨诱导液组、实验对照组，组间比较差异明显(P＜0.05)。OC基因启动子区域甲基化程度依次为左归丸组＜右归丸组＜成骨诱导液组＜正常对照组。 结论:(1)采用贴壁筛选法进行体外分离、纯化、培养骨髓间充质干细胞是切实可行的，将可形成一套完整的体系。(2)补肾经典方“左、右归丸”含药血清具备明显促进骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化。(3)补肾经典方“左、右归丸”含药血清能通过上调骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨基因osterix、oc的表达，促进骨髓间充质干细胞(BMSCs)向成骨方向分化的作用。(4)补肾经典方“左、右归丸”能通过调控骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨基因osterix、oc启动子区域低甲基化的表观遗传学机制，起促进骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨方向分化的作用。