NGF及其受体trkA、p75状翼状胬肉中的实验研究

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本研究分为四部分:   第一部分:NGF及其受体trkA、p75在翼状胬肉组织中的表达   目的:研究翼状胬肉组织中的NGF 及其受体trkA、p75 蛋白表达,探讨其与翼状胬肉形成的关系。   方法:应用免疫组织化学检测30例翼状胬肉组织以及5例正常结膜组织中NGF、trkA和p75 蛋白的表达。   结果:NGF、trkA和p75 蛋白在翼状胬肉组织的上皮细胞、成纤维细胞、血管内皮细胞中呈阳性表达;NGF、trkA 蛋白在正常结膜组织上皮细胞和成纤维细胞中呈弱阳性表达;p75 蛋白仅在正常结膜组织上皮细胞中呈弱阳性表达。   结论:NGF、trkA、p75可能共同参与翼状胬肉的发生、发展过程。   第二部分:p75和α-SMA 在人翼状胬肉组织中的免疫定位   目的:检测p75和α-SMA在翼状胬肉组织的表达定位。   方法:正常结膜组织3例、翼状胬肉组织10例来自手术切除,3例正常角膜组织来自眼库。福尔马林浸泡并石蜡包被切片,用免疫组化方法检测trkA、p75和α-SMA在各种组织中的表达。利用共聚焦荧光显微镜通过免疫双标的方法检测p75和α-SMA在翼状胬肉组织及原代成纤维细胞中的定位。   结果:p75、trkA和α-SMA在翼状胬肉组织成纤维细胞中表达明显。在翼状胬肉组织、正常角膜和结膜组织中检测到p75和trkA的表达。P75和α-SMA在翼状胬肉组织的头部可见阳性表达,在体部阳性表达较少。   结论:在翼状胬肉组织头部p75和α-SMA表达在同一部位,p75表达上调可能参与细胞的增殖。   第三部分:β-NGF对人翼状胬肉成纤维细胞增殖的影响   目的:观察β-NGF(Nerve growth factor)对体外培养人翼状胬肉成纤维细胞(human pterygium fibroblasts,HPF)增殖的影响,探讨翼状胬肉发病机制。   方法:免疫荧光法检测HPF中β-NGF受体trkA、p75的表达,MTT法检测不同浓度β-NGF对HPF的作用,Western-blot及RT-PCR法检测细胞核抗原(PCNA)来评估HPF增殖。   结果:trkA、p75在HPF中呈阳性表达;48h为β-NGF促增殖的高峰期;β-NGF在促HPF增殖的影响呈剂量依赖性。   结论:β-NGF可能通过结合两受体trkA、p75促进了HPF的增殖。   第四部分:trkA 抑制剂对人翼状胬肉成纤维细胞凋亡的影响   目的:探讨trkA抑制剂对体外培养人翼状胬肉成纤维细胞(HPF)生长抑制及其机制。   方法:免疫荧光法检测HPF中β-NGF受体trkA、p75的表达,10~80nmol/LtrkA抑制剂作用24~96h后,MTT比色法检测细胞生长活性,分光光度法检测caspase-3在细胞中的表达,流式细胞仪测定细胞凋亡。   结果:trkA抑制剂能显著抑制HPF的体外生长,呈剂量和时间依赖性;caspase-3活性检测表达增高,凋亡率为8.26%~29.62%(P<0. 01)。   结论:trkA抑制剂可能通过改变HPF中trkA和p75的比率上调caspase-3诱导细胞凋亡。
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