副猪嗜血杆菌病疫苗基础菌株的筛选及其生物学特性研究

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副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)引起猪多发性浆膜炎与关节炎(也称Gl(a)ssers病),该病可以影响从2周龄仔猪到4月龄的青年猪。目前该病已经成为保育猪死亡的主要原因之一,给养猪业带来严重的经济损失。本病原菌共有15个血清型,并且其流行呈现地域性的特征,因此对本病的血清流行病学调查就显得尤为重要。我实验室通过对华南地区的副猪嗜血杆菌的血清流行病学的调查,结果显示我国华南地区的主要流行菌株为4型、5型以及13型,占所有分离菌株的60%。   根据副猪嗜血杆菌华南地区的流行情况,我们对本实验室分离保存的4型、5型和13型菌株进行研究,按照毒力强、免疫原性好、血清交叉反映强、遗传进化关系远的原则,最终筛选出SC086(广东四会)、SC096(广西)、SC028(湖南)三株菌株用于副猪嗜血杆菌疫苗研究的基础菌株。   我们首先对副猪嗜血杆菌的培养基的配制方法进行了一定改进,使其更适合菌株生长。我们对上述三个菌株的形态、培养特性、生化特征、血清学特性等进行了研究,并对其生长曲线进行了绘制。通过试验证明了副猪嗜血杆菌的对数生长期均在2h左右开始,在8~10h结束。菌液中的最高活菌浓度出现在第10~12h,可达5×109CFU/mL。我们将这三个菌株在TSA培养基上面连传15代,对其的传代稳定性进行研究,试验结果表明这三株菌株均具有良好的传代稳定性,符合做为副猪嗜血杆菌疫苗基础菌株的条件。   我们比较研究了副猪嗜血杆菌对Babl/c小白鼠和豚鼠的致病力差别,结果表明豚鼠比较易感但是结果不稳定,大剂量感染Babl/c小鼠可以致死并且结果稳定。我们测定了三株副猪嗜血杆菌对BALB/c小鼠的LD50。血清4型SC096株的LD50为1.98×109CFU;血清5型SC086株的LD50为1.46×109CFU:血清13型SC028株的LD50为1.84×109CFU。对以上菌株我们进行了对BALB/c小白鼠免疫后攻毒的试验,结果证明了使用三价疫苗所产生的保护力要大于单价疫苗,为以后进行三价疫苗的研发奠定了基础。
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