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藏茵陈为我国传统藏药,具有清热解毒,清肝利胆的功效。现代研究表明,藏茵陈中含有环烯醚萜、呫吨酮、三萜等多种类别的化学成分,其中环烯醚萜苷类、呫吨酮苷类成分口服后在肠道内易发生代谢,生成相应的苷元及其衍生物,然后发挥药理作用。本课题以人肠内菌丛为试验模型研究藏茵陈环烯醚萜苷类、呫吨酮苷类成分的代谢过程。主要工作如下: 1、在前期对藏茵陈化学成分及药理活性研究基础上,通过HPD-300大孔吸附树脂继续分离纯化,得到藏茵陈总萜酮。HPLC测得其指标成分(獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷、芒果苷)总含量为87.2％,为后期代谢试验提供物质基础。 2、研究了黑曲霉对藏茵陈总萜酮的生物转化作用,实验表明黑曲霉可有效转化总萜酮中环烯醚萜苷类成分,而对呫吨酮苷类成分(芒果苷)转化效率较低,为藏茵陈总萜酮人肠内菌代谢研究提供一定的试验思路。 3、通过建立的人肠内菌代谢模型,进行了藏茵陈总萜酮的人肠内菌代谢小试培养。采用的细菌转化方式为生长细胞转化法。考察了培养条件,确定了最佳代谢培养时间为24h,底物浓度为1.0mg·mL-1。考察了代谢液不同的处理方式,确定了乙酸乙酯为萃取剂,9000r·min-1高速离心处理,并确定了萃取层为主要分析检测对象。考察了HPLC分析检测条件,确定了检测波长为254nm,流动相为甲醇-0.04%磷酸水梯度洗脱。通过与空白组的比较,确定了D1~D9共9个代谢产物。绘制了时效曲线和量效曲线,分析其代谢规律。 4、在建立的人肠内菌代谢藏茵陈总萜酮模型基础上,进行了藏茵陈总萜酮的人肠内菌代谢扩大培养,并进行了小试样品随行试验。其中有4个主要代谢产物,3个(D1~D3)与前期实验确定的代谢产物相吻合,1个(K1)为扩大培养得到的代谢产物。通过HPLC-DAD、HPLC-MS等手段结合文献报道,初步指认出2个代谢产物,分别为龙胆宁碱(D1)和芒果苷元(K1),结合相关文献,分析龙胆宁碱为獐牙菜苦苷所代谢生成,芒果苷元为芒果苷所代谢生成。并用大孔树脂、反向硅胶柱层析、制备液相等方法对代谢产物进行分离、纯化,结合TLC分析鉴别,HPLC分析检测,得到2个单体代谢物成分(D2、D3)。为后期串联Caco-2细胞模型和肝微粒体代谢模型等多项仿生技术模拟研究藏茵陈口服后在体内跨膜吸收和肝代谢过程提供物质基础。