人宫颈癌干细胞的分离、鉴定及其差异microRNA筛选

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目的:通过人宫颈癌细胞中侧群细胞的富集、分离和鉴定,确定其肿瘤干细胞的生物学特性。筛选人宫颈癌干细胞差异表达的microRNA。  方法:取16例行宫颈鳞癌切除术的宫颈癌标本,进行宫颈癌细胞原代培养,流式细胞仪分选侧群细胞(Side Population,SP),研究SP细胞和非SP细胞(Non Side Population,NSP)的体外克隆形成能力和裸鼠成瘤能力。利用宫颈癌SP细胞和NSP细胞,分别提取总RNA及microRNA,用microRNA芯片分别检测SP细胞和NSP细胞的microRNA表达谱并进行分析,筛选出人宫颈癌SP细胞差异表达的microRNA。  结果:在原代培养的16株宫颈癌细胞中均分选出SP细胞,比例约占1.67%±0.94%。SP细胞的克隆形成能力显著高于NSP细胞(0.51±0.07,0.05±0.02,P<0.01),SP细胞在裸鼠肿瘤形成能力显著高于NSP细胞,仅1×104个SP细胞即可使裸鼠形成肿瘤,而至少1×106个NSP细胞才能形成肿瘤。MicroRNA芯片筛选出表达差异在10倍以上的microRNA有16条,其中上调有3条,为has-miR-451a、has-miR-5707和has-miR-486-5p;下调有13条,为has-miR-100-5p、has-miR-31-5p、has-miR-146a-5p、has-miR-143-3p、has-miR-20a-5p、has-miR-495、has-miR-27a-3p、has-miR-30a-5p、has-miR-21、has-miR-27b-3p、has-miR-34a-5p、has-miR-124b、has-miR-26a-5p;差异表达超过共同2倍的microRNA有7条,其中3条microRNA上调,为has-miR-720、has-miR-4286、has-miR-3665;4条microRNA下调,为has-miR-31、has-miR-143-3p、has-miR-27a、has-miR-27b。  结论:人宫颈癌细胞中存在外排Hoechst33342荧光染料的SP细胞,宫颈癌SP细胞克隆形成能力、裸鼠成瘤能力均强于NSP细胞,具备肿瘤干细胞的特性,可作为宫颈癌干细胞研究的切入点。人宫颈癌侧群细胞表达一些特异的microRNA,这种microRNA分子在肿瘤干细胞中的高表达或低表达可能与肿瘤干细胞的相关特性有着重要联系,进一步针对microRNA表达的研究将为宫颈癌干细胞在发病机制和靶向治疗等方面的认识上提供新的思路。
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