薄盖灵芝多糖的分离纯化、结构鉴定及抗肿瘤活性研究

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本论文以深层发酵的薄盖灵芝(Ganoderma capense)菌丝体粉末为研究对象,对其多糖的结构进行了较系统的研究,对其体外抗肿瘤活性进行初步探讨,概括如下:1、粗多糖提取、分离和纯化:薄盖灵芝菌丝体粉末经热水/稀碱提取后,采用分级醇沉、脱蛋白、透析、冻干得四个粗多糖部位,即P50、P70、P90、PB,产率分别为:13.4%、1.87%、1.2%、1.1%。各多糖部位再分别经DEAE Sepharose CL-6B和Sephadex G-75柱层析纯化,得到六个多糖GCP50-2、GCP50-3、GCP70-1、GCP70-3、GCP90-2和GCP90-3。经比旋光度法和高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)验证多糖纯度,结果表明六个多糖均为均一多糖。各多糖的比旋光度值[α]D25分别为+113°、+129°、+131°、+168°、+146°、+142°。高效凝胶渗透色谱显示其分子量分别为3167、8123、10685、32436、6381、5808 Da。2、结构鉴定:利用高效液相色谱对六个精多糖进行单糖组成分析,结果显示GCP50-2、GCP50-3、GCP70-1均为葡聚糖,重复单元结构中主链都由(1→4)-α-D-Glc和(1→4,6)-α-D-Glc组成,侧链由(1→)-α-D-Glc组成。而GCP70-3是由甘露糖、葡萄糖、半乳糖、木糖和阿拉伯糖组成的杂多糖,主链由→2,3,4)-β-D-Xyl-(1→、→3,6)-β-D-Man-(1→、→3)-β-L-Ara-(1→和→6)-β-D-Gal-(1→组成,支链由β-D-Xyl-(1→和β-D-Glc-(1→构成末端。GCP90-2和GCP90-3则主要由葡萄糖、半乳糖、木糖和阿拉伯糖组成,还含有少量的甘露糖和鼠李糖,其中,GCP90-2的主链由→4,6)-β-D-Glc-(1→、→3)-β-D-Gal-(1→、→3,4)-β-D-Xyl-(1→、→3,6)-β-D-Man-(1→组成,支链由→3)-β-L-Ara-(1→、β-D-Xyl-(1→、β-L-Ara-(1→和β-L-Rha-(1→组成,GCP90-3由→6)-α-D-Glc-(1→、→3)-α-L-Ara-(1→、→3)-α-D-Gal-(1→、→3,4)-α-D-Xyl-(1→、→3,6)-α-D-Man-(1→组成主链,支链为α-L-Ara-(1→和α-L-Rha-(1→。利用酸水解、甲基化-乙酰化-GC-MS分析、紫外、红外光谱、一维、二维核磁共振等方法对多糖的结构进行分析,推出六个精多糖的一级结构重复单元。利用圆二色谱、扫描电镜、刚果红实验、原子力显微镜对六个精多糖进行高级结构的研究。文献检索发现六个精多糖的结构均未见报道。3、药理活性:采用MTT法初步考察薄盖灵芝粗多糖(P50、P70、P90、PB)、精多糖(GCP50-2、GCP50-3、GCP70-1、GCP70-3)对六种肿瘤细胞(MGC-803、SGC-7901、Hela、CNE-1、Hep G-2、A549)增殖的抑制作用。结果显示碱提粗多糖PB和精多糖GCP70-3对肿瘤细胞MGC-803、SGC-7901、Hela、CNE-1的增殖有抑制活性。同时,考察了碱提薄盖灵芝精多糖(GCPB-1a、GCPB-1b、GCPB-2、GCPB-3)和精多糖GCP70-3对胃癌细胞MGC-803增殖抑制作用与培养时间、剂量的关系,结果显示GCPB-1a、GCPB-1b、GCPB-2和GCP70-3以时间、剂量依赖性方式抑制MGC-803细胞的增殖。
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