胃泌素在体外对胃癌细胞血管生成的作用

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【目的】通过体外三维培养研究胃泌素对胃癌细胞 SGC-7901、AGS血管生成拟态和人脐静脉血管内皮细胞 HUVEC血管生成的作用,探讨胃泌素在胃癌转移分子机制中的作用。  【方法】三维培养 SGC-7901、AGS和HUVEC细胞,分别加入终浓度为10nmol/L、100nmol/L的胃泌素培养72h后随机取5个视野计数不同浓度胃泌素处理的胃癌细胞和HUVEC细胞的管状结构数;同时进行 PAS、HE染色观察胃泌素对胃癌细胞血管生成拟态的影响;利用 RT-PCR、WesternBlot和免疫化学的方法检测人体多种组织和细胞中人胃泌素受体(CCK-BR)和HUVEC细胞血管标记(CD31)的表达情况;通过 Real-timePCR、ELISA的方法检测不同浓度胃泌素对胃癌细胞和HUVEC细胞血管生成相关细胞因子VEGF、HIF-1α基因和蛋白水平的影响;用 MTT比色法和软琼脂克隆形成实验,观察不同浓度胃泌素对胃癌细胞和HUVEC细胞体外增殖能力和克隆形成率的影响。  【结果】胃癌细胞 SGC-7901、AGS在三维培养条件下能够形成血管生成拟态,HUVEC细胞能够形成血管结构;10nmol/L和100nmol/L的胃泌素处理胃癌细胞和HUVEC细胞后血管生成拟态数和HUVEC细胞的管状结构数明显高于对照组(0nmol/L胃泌素处理组),差异有统计学意义(P<0.05);RT-PCR、WesternBlot和免疫化学结果显示,胃癌细胞SGC-7901、AGS和HUVEC细胞CCK-BR表达阳性;且 HUVEC细胞 CD31表达也是阳性;此外,在肝癌、肺癌等肿瘤细胞和胃癌、宫颈癌等6种临床组织标本中 CCK-BR也有表达;胃癌细胞SGC-7901、AGS和HUVEC细胞经不同浓度胃泌素处理后 HIF-1α基因表达水平均高于对照组,HUVEC细胞中 VEGF基因表达水平在10nmol/L和100nmol/L胃泌素组中均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05); SGC-7901、AGS和HUVEC细胞经10nmol/L和100nmol/L胃泌素处理后分泌性 VEGF蛋白水平、细胞增殖率和细胞克隆形成率均高于对照组,同时随胃泌素浓度的增加而增高,差异有统计学意义(P<0.05)。  【结论】(1)除胃癌细胞、组织和HUVEC细胞外,人体内多种组织细胞也表达胃泌素受体 CCK-BR,同时,胃泌素和CCK-BR结合后可以促进胃癌细胞和HUVEC细胞体外增殖能力;(2)胃泌素可以促进胃癌细胞体外血管生成拟态和人 HUVEC细胞血管生成的能力;(3)胃泌素能上调胃癌细胞 SGC-7901、AGS以及 HUVEC细胞中HIF-1α基因表达和HUVEC细胞中VEGF基因表达,增高胃癌细胞 SGC-7901、AGS以及 HUVEC细胞中分泌性 VEGF蛋白的水平。
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