论文部分内容阅读
背景:人类胚胎干细胞是最具自我更新及多项分化潜能的干细胞。胚胎干细胞要想应用于临床,还有几个方面的问题。比如:伦理问题、安全性问题、GMP问题等,其中一个较大的屏障就是免疫排斥问题。解决免疫排斥问题的一个主要的办法就是像骨髓库一样,建立HLA多态性丰富的人类胚胎干细胞库。但是究竟要多少株胚胎干细胞才能满足临床移植需要,本研究对人类干细胞国家工程研究中心建立的胚胎干细胞系进行HLA及ABO基因分型,分析胚胎干细胞库的HLA匹配潜能。
方法:采用聚合酶链式反应序列特异性引物(PCR-SSP)的方法,对人类干细胞国家工程研究中心人类胚胎干细胞库的184株人类胚胎干细胞系进行HLA-A、B、DRB1及ABO血型基因分型。将获得的分型结果数据与中华骨髓库湖南分库5236名随机人群的HLA及ABO血型数据进行如下分析:①比较两组数据的等位基因频率;②将湖南随机人群作为假定的需要进行器官移植或其它干细胞治疗的患者,将人类胚胎干细胞库的正常胚胎干细胞系作为供者,计算随着胚胎干细胞系数目的增加,随机人群患者在六种不同的HLA匹配水平上(0-0-0、1-0-0、0-1-0、0-0-1、1-1-0及*-*-0)上找到至少一株胚胎干细胞系供者的几率;③计算不同血型及民族对在人类胚胎干细胞库中寻找供者的几率;④评估HLA三座位纯合子在胚胎干细胞库中的作用。
结果:184株胚胎干细胞系HLA及ABO基因分型均获得了成功,其中174株胚胎干细胞系为正常二倍体,HLA分型结果可用于进行HLA匹配分析,另外10株为三倍体。174株胚胎干细胞系的HLA等位基因频率与5236名湖南随机人群较为相近。随着胚胎干细胞系数目的增加,随机人群在胚胎干细胞库中找到HLA匹配供者的比例也逐渐增加。174株胚胎干细胞系可为24.94%的湖南随机人群提供HLA-A、B、DRB1低分辨完全匹配的供者,此外,可分别提供35.14%、56.26%、49.83%、83.40%及93.45%的A位点单错配、B位点单错配、DRB1位点单错配、A和B两位点单错配及DRB1位点零错配的潜在移植供者。不同血型胚胎干细胞在HLA配型中的作用随着ABO血型O→A→B→AB的转变而降低,同时AB/A型的患者比B/O型患者更易找到HLA相配的胚胎干细胞供者;汉族与少数民族人群在胚胎干细胞库中找到HLA匹配的供者的比例没有统计学差异。8株HLA三座位纯合的胚胎干细胞系的HLA匹配效率占174株干细胞系的58.82%-81.39%;频率最高的4个HLA单倍型(HF>2%)O型纯合子胚胎干细胞系可为31.01%的患者提供HLA全匹配的供者。
结论:
1.建立了人类胚胎干细胞库HLA-A、B、DRB1及ABO血型的基因分型方法。
2.人类胚胎干细胞库可以为24.94%-56.26%的湖南人群及更多的中国人群找到HLA较好匹配(beneficial match)的干细胞供者,同时还能为少数民族患者服务。
3.增加人类胚胎干细胞库的库容,尤其是O型常见HLA单倍型纯合子细胞系的数目,能够提高HLA匹配的几率,从而使更多的人群从中受益。