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目的：
树突状细胞(Dendritic cells，DCs)是目前发现的功能最强大的抗原递呈细胞(Antigen presenting cells，APC)，能高效能递呈抗原，且是唯一能激活初始型T淋巴细胞的抗原递呈细胞，具有独特的诱导初始免疫反应对抗肿瘤的能力。目前在DCs疫苗抗肿瘤实验研究和临床研究方面已取得了令人振奋的进展，显示了广泛的应用前景。但肿瘤疫苗研制中仍然存在着一个主要问题：大多数肿瘤抗原的免疫原性很弱，不能正常的被呈递以激活细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxict lymphocytes，CTLs)，为了提高其免疫原性，必须加入佐剂。研究已表明HSP70具有佐剂样作用，HSP70可以促进DCs成熟，刺激多种细胞因子的分泌而增强免疫功能。本研究对DCs被重组人热休克蛋白70(recombinant human heat shock protein70，rhHSP70)和肝癌冻融抗原共同修饰前后的表型变化、形态变化及诱导CTLs产生的体外杀伤肝癌细胞作用进行了观察，以其明确rhHSP70联合肝癌冻融抗原共同修饰DCs后，体外可诱导产生针对肝癌细胞的高效杀伤作用，并初步探讨了rhHSP70增强DCs疫苗抗肿瘤能力的机制，为设计以DCs为基础的针对肝癌的生物治疗的高效瘤苗提供实验依据和理论基础。
方法：
分离健康人外周血获得单个核细胞，经粒—巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte—macrophage colony—stimulating factor，GM—CSF)，白细胞介素4(interleukin—4，IL—4)诱导生成DCs，负载冻融抗原的同时加入rhHSP70，分为四组：①A组：DCs+冻融抗原(Ag)；②B组：DCs+rhHSP70；③C组：DCs+Ag+rhHSP70；④D组：单独DCs。流式细胞术(flow cytometry，FCM)检测各组DCs表型(CD80，CD83，CD86)变化，倒置显微镜和扫描电镜观察各组DCs形态特点。不同分组修饰的DCs激活淋巴细胞生成CTLs，四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测DCs刺激淋巴细胞增殖能力以及CTLs对肝癌细胞的体外杀伤活性，荧光染色观察各组肝癌细胞凋亡差异。
结果：
rhHSP70，冻融抗原及二者联合修饰的DCs表型较对照组相比差异显著(P<0.05)。CD80：A组为80.2±2.5％，B组为79.6±2.6％，C组为81.6±2.3％，D组为21.5±1.4％。CD83：A组为71.3±2.9％，B组为68.3±2.4％，C组为73.4±2.1％，D组为33.4±2.4％。CD86：A组为74.2±3.6％，B组为75.3±4.8％，C组为82.5±5.0％，D组为48.2±2.8％。
光镜及扫描电镜下可见rhHSP70，冻融抗原及二者联合修饰的DCs较对照组树枝状突起明显增加，表现出成熟DCs的形态特征，而对照组表现出相对不成熟DCs的形态特征。
不同分组修饰的DCs刺激淋巴细胞增殖能力不同，结果以增殖指数(proliferation index，PI，增殖指数=实验组OD值/对照组OD值)表示。其中A组为2.10±0.05，B组为2.06±0.05，C组为2.60±0.06，D组为1.20±0.05，PI以C组为最高，与其他两试验组(A，B组)相比差异显著(P<0.05)，其次为A组，但A组与B组比较差异无统计学意义(P>0.05)。
不同分组DCs呈递肿瘤抗原诱导的CTL产生杀伤率不同，杀伤百分率=(1—实验组的OD值/对照组的OD值)×100％。在效靶比(效应细胞：靶细胞，即CTLs：肝癌细胞)为10：1，20：1，50：1时，A组杀伤率分别为40.27±4.89％，47.13±8.05％，51.64±6.73％，B组杀伤率分别为13.58±4.77％，12.13±4.26％，15.57±5.55％，C组杀伤率分别为61.09±7.89％，64.71±3.90％，74.59±3.34％，D组杀伤率分别为11.94±4.11％，13.90±4.11％，13.52±4.61％，在三种效靶比下杀伤率以C组为最高，与其他两试验组(A组，B组)相比差异显著(P<0.05)，更远强于对照组(P<0.05)；其次为A组；B组与D组比较差异无统计学意义(P>0.05)。
结论：
rhHSP70联合肝癌冻融抗原修饰DCs，能够促进DCs的成熟，增强DCs刺激淋巴细胞增殖的能力，诱导的CTLs在体外对肝癌细胞能产生高效杀伤。rhHSP70增强DCs抗肿瘤能力的机制可能与其促进DCs成熟有关。