【摘 要】
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该研究采用增强型绿色荧光蛋白eGFP标记MKLP1形成融合蛋白的方法研究MKLP1蛋白的定位问题:构建了十三种eGFP标记的MKLP1分子的缺失突变体,并将其转染E18原代培养大鼠海马神经
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该研究采用增强型绿色荧光蛋白eGFP标记MKLP1形成融合蛋白的方法研究MKLP1蛋白的定位问题:构建了十三种eGFP标记的MKLP1分子的缺失突变体,并将其转染E18原代培养大鼠海马神经元,了解其是否会特异分布到树突,并观察其分布变化以期找到负责MKLP1树突靶向的结构域.主要结果如下:MKLP1蛋白的mRNA在海马等神经元内主要分布在胞体,看不到明显的突起内分布,可见MKLP1蛋白的海马神经元树突特异分布不是其mRNA的特异分布引起的.绿色荧光蛋白标记的全长MKLP1(856)蛋白分子可以分布到原代培养大鼠海马神经元的胞体及树突,而不分布到轴突.MKLP1 N端"马达"域(AA162-460)对于其树突分布是必要的,因为去除N端"马达"域后的重组分子461-856不能分布到突起.C端711-856AA尾部结构是MKLP1分子分布到树突的重要保证,因为去除C端"尾"域后的重组分子可分布到轴突;C端结构完整性对于其只在树突分布,限制其在轴突扩散是必须的,因为去除C端16个氨基酸的重组分子也可分布到轴突.MKLP1"茎"域对于其树突分布不是必要的,因为去除后的重组分子仍可特异分布到原代培养的SD大鼠海马神经元树突.MKLP1(960)剪切体中可与肌动蛋白结合的AA691-AA794共1045个氨基酸与MKLP1树突特异分布并无直接联系.这一研究从分子水平上了解MKLP1树突靶向机制.为进一步研究控制MKLP1分子进入树突也即神经元维持树突形态及功能的方式打下了基础.
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