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目的: 1、在病证结合、方证相应理论的指导下，以具体病证“子宫脱垂之中气下陷证”为载体，以治疗该病证的代表方剂补中益气汤为依托，结合盆底结缔组织胶原代谢异常是子宫脱垂主要因素的研究学说;围绕盆底主要结缔组织胶原代谢环节，探讨益气升阳治法的效应特征及机制。 2、利用HPLC-MS/MS技术，建立同时测定大鼠血浆中补中益气汤多种有效成分的分析方法，测定多种有效成分的的血药浓度并初步研究其的药代动力学行为，为进一步阐明补中益气汤之益气升阳治法效应的物质基础提供一定的参考。 方法: 本研究分为以下三部分内容: 1.采集子宫脱垂患者（中气下陷证）的子宫主韧带标本，进行体外原代细胞培养;以补中益气汤原方为基础，采用主效药物治法拆方结合药物组间关系研究法，即以:全方、补气拆方（黄芪、甘草、参、白术）、升提拆方（升麻、柴胡）、补血行气拆方（当归、橘皮）、1号方组（升提拆方+补气拆方）、2号方组（升提拆方+补血行气拆方）和3号方组（补气拆方+补血行气拆方）的含药血清、空白血清、全方原药和无干预组对人子宫主韧带成纤维细胞进行干预;采用羟脯氨酸法测定各组的总胶原含量;明确补中益气汤及其拆方对子宫脱垂患者子宫主韧带成纤维细胞总胶原的影响。 2.采集子宫脱垂患者（中气下陷证）的子宫主韧带标本，进行体外原代细胞培养;予全方原方、全方含药血清、空白血清和阴性对照（无干预组）对人子宫主韧带成纤维细胞进行干预;采用分子生物学技术（Western Blot法、RT-PCR法），围绕胶原合成（Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、LOX、TGF-β、CTGF和DCN），降解（MMP-1、MMP-2、TIMP-1、TIMP-2、和TIMP-3）的主要环节;从细胞、分子水平研究补中益气汤对子宫脱垂患者子宫主韧带成纤维细胞胶原代谢环节的影响。 3.建立同时测定大鼠血浆中补中益气汤多种有效成分（黄芪甲苷、毛蕊异黄酮、甘草酸、甘草次酸、柴胡皂苷D、橙皮苷和阿魏酸）的HPLC-MS/MS分析方法，并进行方法学考察。 4.SD大鼠单次灌服补中益气汤，HPLC-MS/MS法测定多个有效成分的血药浓度，并计算药动参数。 结果: 1.补中益气汤对子宫脱垂患者子宫主韧带成纤维细胞总胶原蛋白及Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白影响 1.1 与空白血清组或无干预组比较，全方血清组和原药全方组细胞培养液中总胶原的含量均明显增加(P＜0.01);升提拆方组细胞培养液中总胶原的含量明显减少（P＜0.01）;补气拆方和1号方组细胞培养液中总胶原的含量有增加的趋势，其余各组细胞培养液中总胶原的含量无明显变化。 1.2 与空白血清组或无干预组比较，全方血清组和原药全方组子宫脱垂患者子宫主韧带成纤维细胞Ⅲ型胶原mRNA(P＜0.01)及蛋白(P＜0.01)的表达均明显增加。 1.3 各组对Ⅰ型胶原mRNA表达无影响。 2.补中益气汤对子宫脱垂患者子宫主韧带成纤维细胞胶原分解代谢环节影响 2.1与空白血清组或无干预组比较，全方血清组成纤维细胞MMP-1 mRNA(P＜0.01)及蛋白（P＜0.05）的表达均减少，TIMP-1 mRNA(P＜0.01)及蛋白（P＜0.01）和TIMP-3 mRNA(P＜0.01)及蛋白(P＜0.05)的表达均增加;且全方血清组MMP-1mRNA(P＜0.01)表达的降低优于原药全方组，TIMP-1 mRNA(P＜0.05)及蛋白(P＜0.01)和TIMP-3 mRNA(P＜0.01)表达的增加均优于原药全方组。与无干预组比较，原药全方组成纤维细胞MMP-1 mRNA(P＜0.05)及蛋白(P＜0.05)的表达均减少，空白血清组MMP-1 mRNA(P＜0.05)的表达也减少。 2.2 与空白血清组或无干预组比较，全方血清组和原药全方组成纤维细胞MMP-2 mRNA(P＜0.01)及蛋白的表达均减少，且原药全方组MMP-2 mRNA表达的降低优于全方血清组(P＜0.05)。 2.3 各组对TIMP-2 mRNA的表达均无影响。 3.补中益气汤对子宫脱垂患者子宫主韧带成纤维细胞胶原合成代谢环节影响 3.1 与空白血清组或无干预组比较，全方血清组和原药全方组成纤维细胞LOX mRNA(P＜0.01)的表达均明显增加。与无干预组比较，全方血清组和原药全方组LOX蛋白（P＜0.05）的表达均增加。 3.2 与无干预组比较，全方血清组、原药全方组和空白血清组成纤维细胞DCNmRNA的表达均增加，且全方血清组的增加优于原药全方组（P＜0.01）。与空白血清组比较，原药全方组成纤维细胞DCN mRNA的表达明显减少(P＜0.01)。 3.3 各组对TGF-βmRNA、CTGF mRNA的表达均无影响。 4.建立了双氯芬酸为内标同时测定大鼠血浆中补中益气汤多种有效成分（黄芪甲苷、毛蕊异黄酮、甘草酸、甘草次酸、柴胡皂苷D、橙皮苷和阿魏酸）的HPLC-MS/MS分析方法。采用ESI源负离子模式，多反应离子(MRM)监测进行分析，血浆中的内源性物质不干扰待测物的测定。血浆样品采用乙腈沉淀蛋白处理，旋转蒸发挥干复溶。流动相中的水相为含0.1％甲酸的4 mmol·L-1醋酸铵水溶液，有机相为乙腈，梯度洗脱。被测成分分别在0.5～25ng/mL，0.5～100ng/mL，5～2000ng/mL,2.5～1000ng/mL,0.2～100ng/mL,0.5～1000ng/mL和2～1000ng/mL范围内线性关系良好，定量下限分别为0.5ng/mL，0.5ng/mL，5ng/mL，2.5ng/mL，0.2ng/mL，0.5ng/mL和2ng/mL，待测物和内标的提取回收率稳定，方法的专属性、基质效应、精密度、准确度和稳定性均符合生物样品分析要求。 5.采用所建立的方法测定了大鼠单次灌胃补中益气汤后血浆中多种有效成分的浓度，获得了其在大鼠体内的药代动力学参数。灌胃给药后的黄芪甲苷、毛蕊异黄酮、甘草酸、甘草次酸、柴胡皂苷D和阿魏酸的Tmax分别为1.70±0.27h，0.35±0.24h，1.86±1.53h，8.40±2.19h，0.63±0.49h和0.233±0.09h; T1/2分别为6.21±2.28h，5.28±2.32h，4.25±1.25h，8.33±2.18h，10.11±12.4h和3.49±1.53h。 结论: 1.益气升阳法基于胶原代谢环节层面的部分效应特征为:提高总胶原含量，且以Ⅲ型胶原为主，对Ⅰ型胶原无明显影响。 2.益气升阳法的此效应特征的机制可能与胶原合成环节中增加LOX的表达和胶原降环节中降低MMP-1和MMP-2的表达及增加TIMP-1和TIMP-3的表达有关。 3.从胶原代谢角度出发，提示补中益气汤集补气、升提、补血行气于一身，各环节相互为用，共达益气升阳之效。 4.所建立的HPLC-MS/MS分析方法具有特异性好、准确、选择性强的特点，可用于黄芪甲苷、毛蕊异黄酮、甘草酸、甘草次酸、柴胡皂苷D、橙皮苷和阿魏酸在大鼠的药代动力学研究，为进一步阐明补中益气汤之益气升阳治法效应的物质基础提供一定的参考。