【摘 要】
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为了研制卵黄抗眼镜王蛇毒抗体并探讨卵黄抗体应用于蛇伤诊断的可行性,该课题主要从以下三个方面开展研究工作.一、以甲醛减毒的眼镜王蛇毒免疫莱航母鸡,以ELISA法监测特异性
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为了研制卵黄抗眼镜王蛇毒抗体并探讨卵黄抗体应用于蛇伤诊断的可行性,该课题主要从以下三个方面开展研究工作.一、以甲醛减毒的眼镜王蛇毒免疫莱航母鸡,以ELISA法监测特异性卵黄抗体效价的动态变化,结果母鸡初次免疫第12天即有抗眼镜王蛇毒鸡卵黄抗体产生,初次免疫60天后抗体效价超过1∶100000.卵黄抗体经水稀释法粗提后,再用嗜硫色谱法纯化,有效峰经SDS-PAGE(非还原状态)检测为电泳纯,分子量约为193KD,还原状态下显示由重链(68KD)和轻链(32KD)构成.ELISA法及双向免疫扩散证实制备的抗体具有较高的特异性及免疫活性.二、采用过碘酸钠法对制备的抗体进行辣根过氧化酶(HRP)标记,制备了HRP标记的卵黄抗眼镜王蛇毒抗体;三、眼镜王蛇伤诊断方法的建立及其方法学研究.该课题以40μg/ml的卵黄抗眼镜王蛇毒抗体包被酶标板,以300倍稀释的HRP-卵黄抗眼镜王蛇毒抗体为酶标抗体,四甲基联苯胺(TMB)为底物,建立夹心ELISA法,用于眼镜王蛇毒检测.实验研究充分显示:1)蛇毒易于诱导母鸡产生高效及特异性IgY抗体.由于采用鸡作为免疫媒体,可从鸡蛋中连续获取大量均一的特异性免疫球蛋白,因此,母鸡将是制备和生产新型抗蛇毒抗体的有效生物反应器.2)IgY抗体用于蛇伤诊断是可行的.该实验建立的检测方法对蛇伤诊断,评价抗蛇毒血清治疗的有效性,鉴定蛇毒致死案件及对蛇伤的免疫学和流行病学的研究具有重要意义.
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