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目的:探讨人参皂苷Rg3诱导小鼠肿瘤细胞内质网应激反应性细胞凋亡。
方法:复制荷lewis瘤昆明小鼠为模型,随机分成4组:对照组:生理盐水0.4ml;低剂量组:人参皂苷Rg3 10mg.kg-1.d-1;中剂量组:人参皂苷Rg3 20mg.kg-1.d-1;高剂量组:人参皂苷Rg3 30mg.kg-1.d-1。10天后,剖出肿瘤称重;HE染色观察凋亡;流式细胞仪检测瘤细胞的凋亡率;SABC法检测GRP78的蛋白表达;Western-blot检测GRP78及procaspase-12的蛋白表达;RT-PCT检测caspase-12 mRNA的表达。
结果:
1.低、中、高剂量组的瘤重(g)分别为1.93±0.07、1.70±0.04、1.40±0.05,低于生理盐水组2.18±0.04。低、中、高剂量组的瘤重组间有显著差异。低、中、高剂量组的抑瘤率(%)分别是11.47、22.02、35.78。
2.HE染色观察显示,实验组凋亡细胞表现为核染色质致密浓缩,核碎裂等。在对照组中,可见少数凋亡细胞散在分布;在低、中、高剂量组中可见较多凋亡细胞散在分布。
3.流式细胞仪检测结果:低、中、高剂量组人参皂苷Rg3诱导肿瘤细胞的凋亡率(%)分别为20.16±0.44、28.25±0.17、35.34±0.36,它们明显高于生理盐水组3.22±0.17,差异有显著意义。低、中、高剂量组的凋亡率组间差异有显著意义。
4.SABC检测结果:低、中、高剂量组GRP78的表达量(OD值)分别为0.16±0.02、0.20±0.03、0.324±0.03,它们明显高于生理盐水组0.09±0.03,差异有显著意义。低、中、高剂量组表达量组间差异有显著意义。
5.Western-blot检测结果:GRP78表达量低、中、高剂量组GRP78的相对表达量(GRP78/B-actin)分别为3.40±0.05、3.70±0.06、3.98±0.06,与生理盐水组2.91±0.04,差异有显著意义。低、中、高剂量组GRP78表达量组间差异有显著意义。低、中、高剂量组procaspase-12的相对表达量(procaspase-12/β-actin)分别为0.21±0.03、0.29±0.03、0.39±0.03,它们明显低于生理盐水组0.48±0.03,差异有显著意义。低、中、高剂量组表达量组间差异有显著意义。
6.RT-PCR检测结果:低、中、高剂量组caspase-12 mRNA的相对表达量(caspase-12/β-actin)分别为2.00±0.06、2.52±0.07、3.01±0.06,它们明显高于生理盐水组1.48±0.06,差异有显著意义。低、中、高剂量组表达量组间差异有显著意义。
结论:
1.人参皂苷Rg3可抑Nd,鼠肿瘤生长。
2.人参皂苷Rg3可诱导小鼠肿瘤细胞凋亡。
3.人参皂苷Rg3可引起内质网应激致GRP78高表达。
4.人参皂苷Rg3可诱导小鼠肿瘤细胞内质网应激反应性凋亡:活化procaspase-12;提升caspase-12 mRNA的表达。