大鼠神经细胞蛋白质复合物组学和多肽组学研究

来源 :湖南师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yuhang0211
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)细胞是一种初级感觉神经元,能传导触觉、痛觉、温觉等神经冲动。它们沟通脊髓与机体内外环境的联系,不仅传输和调节机体的各种感觉,而且还具有接受和传递机体各种伤害性感受的功能,因而在神经病理性疼痛的发生与维持中起着重要的作用。开展DRG细胞膜蛋白的研究具有重要意义,将为探讨神经系统疾病的发生机制、疾病的诊断和新药开发将提供重要的理论基础。由于大鼠DRG神经组织体积较小而质膜蛋白质又大多具有低丰度和强疏水性的特点,所以在样品的采集、溶解和蛋白质鉴定等方面给DRG细胞质膜蛋白质组学研究带来了更大的挑战。大多数细胞的生物学功能都是由蛋白复合体而非单一蛋白质来完成的,因此,蛋白质复合物的研究已成为蛋白质组学中最重要研究内容之一。本研究用含温和去垢剂的缓冲液提取大鼠DRG细胞细胞浆和膜组分中的蛋白质复合物后,采用BN-PAGE结合SDS-PAGE的方法对蛋白质复合物进行电泳分离,再用CapLC-MS/MS进行分析。一共鉴定了非冗余蛋白质460个,包括若干细胞浆和膜组分中的蛋白质复合物的亚基。   多肽组就是指生物体器官、组织、细胞和体液中全部内源性多肽组份。多肽组学是研究多肽的结构、功能、变化规律等及其相互关系的学科。多肽组学和蛋白质组学都是作为基因组学的补充,多肽组学填补了代谢组学与蛋白质组学之间的“间隙”。常规的蛋白质组研究策略并不适合多肽组的研究,因为常规的蛋白质组研究策略不能有效鉴定低分子量区域的多肽。影响多肽组分析的一个主要因素就是大脑及大多数其它组织中的多肽水平低于蛋白质降解产生的多肽水平。此外,动物体内的蛋白酶会在动物死后短时间内降解蛋白质。已有研究结果表明,常规微波炉能有效的阻止动物死后蛋白质的降解。海马是大脑边缘系统结构中最重要的组织之一,在学习和记忆中起着重要作用。为了研究海马多肽的种类、结构和作用,我们就海马的多组学展开了研究。首先,将大鼠的头颅置于家用微波炉并在10s内将海马组织的温度升至80℃,从而使海马组织中的各种酶失活,然后用乙酸和尿素分别进行提取内源性多肽。提取液分别用分子截留量为10 kD超滤管进行超滤,RP-HPLC脱盐后加入10mM DTT,再用TOF-Q MS进行鉴定。得到的数据文件运用MASCOT软件分析。库搜寻时的主要参数为:酶:无;固定修饰:无;可变修饰:N末端乙酰化,C末端酰胺化,甲硫氨酸氧化,磷酸化和脱氨基化。实验结果表明,从微波辐射加热处理的海马组织提取物中共鉴定到非冗余多肽82个,而未经微波加热处理时只鉴定到13个。在鉴定的82个多肽中,66个多肽从乙酸提取物中鉴定到,26个从尿素提取物中鉴定到。进一步的分析显示,部分鉴定的多肽为已知多肽,而另一些为本研究新鉴定的神经多肽。
其他文献
  Chinas Food and Drug Administration (CFDA) recently announced several new policies and approaches to reform its review and approval process, including the d
会议
该文首先研制了一种响应速度快的能在线检测发酵液中甲醇浓度的传感器,考察了不同甲醇流加策略对重组毕赤酵母高密度发酵产水蛭素的影响.在分离纯化并鉴定出水蛭素的四种活性
  Introduction Cancer drug resistance is referring to the tolerance of cancer cells when treated with chemotherapy.Once the drug resistance occurs, therapeuti
会议
近几年来,随着工业的发展,水资源污染的话题成了当今社会一个热门话题,国家对化工厂废水排放的标准也越来越严格。有机胺废水因为其组成成分复杂、起始COD高、不可生化、副产物
本研究在对大笨子石榴园进行节肢动物群落系统调查的基础上,用群落分析方法分析了石榴园节肢动物群落结构及其时间、空间动态变化,并利用灰色系统、生态位、聚集强度等数学方
近年来,超滤技术广泛应用于工业浓缩和纯化过程,如何提高聚合物超滤膜性能的研究很多,但中空纤维膜超滤膜性能的研究相对较少,因为中空纤维膜的制备过程涉及更复杂的因素,在
  pH-responsive drug delivery systems are promising in their applicability to many areas,especially the anti-cancer therapy.Coordination complexes have the ca
会议
本实验通过UV辐照和NTG诱变处理杜氏盐藻野生型藻株得到一株杜氏盐藻高产玉米黄素突变株Zea1,以此突变藻株为实验材料,系统研究了光照强度、盐浓度、碳源、氮源、磷源等对Zea1
学位
本论文以淀粉和阳离子淀粉作为模板剂,合成出了一种复合多孔材料.采用淀粉原位糊化降解的方法,对ZSM-5分子筛进行组装,合成出了新型的复合多孔材料St-ZSM-5.用XRD、FT-IR对该