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姜黄素提取于植物姜黄的干燥根茎,具有多样的生物活性和药理作用,可作为抗炎药,抗氧剂,抗肿瘤药,保肝药等。但是,姜黄素在水中溶解度小,导致在体内生物利用度差,药物很快在胃肠道内代谢失活,而增大剂量和给药频率又会增大药物的副作用,限制了姜黄素的临床应用。将纳米脂质载体技术应用于姜黄素制剂,利用甘草次酸配体对肿瘤细胞的识别,提高肿瘤靶向性及生物利用度是本文的核心任务。
本文建立了姜黄素体外含量测定的紫外可见分光光度法,该方法简单,快捷。采用微型柱离心法测定姜黄素纳米脂质载体的包封率。
采用薄膜超声法制备载药纳米脂质载体,通过工艺因素考察,优化了纳米脂质载体的制备工艺。以包封率、粒径为指标,通过单因素考察,确定了总脂质用量、总乳化剂用量和投药量为主要影响因素,采用Box-Behnken效应面法优化了纳米脂质载体的处方,最终制备姜黄素纳米脂质载体。分别从外观、形态、粒径、Zeta电位、载药量及包封率、初步稳定性以及DSC方面考察其理化性质。结果表明,载药纳米脂质载体呈球形。平均粒径为58.3 nm; Zeta电位为-22.6 mV;包封率为93.48%,载药量为2.25%;4℃避光存放15天比较稳定。药物以无定形状态被包裹进纳米脂质载体。
通过筛选PEG-磷脂加入量对纳米脂质载体粒径、包封率、稳定性的影响,制备了PEG修饰的姜黄素纳米脂质载体。合成了一种新型配体-磷脂衍生物,并通过红外光谱、核磁共振氢谱等对衍生物进行表征。利用合成的新型配体-磷脂物制衍生物分别制备了5%、10%和15%(W/W)甘草次酸配体介导的姜黄素长循环纳米脂质载体(Cur-GA-PEG-NLC),分别研究了PEG修饰的姜黄素纳米脂质载体和三种甘草次酸介导的姜黄素长循环纳米脂质载体的基本理化性质。结果表明,三种甘草次酸介导的姜黄素长循环纳米脂质载体包封率分别为95.31%、93.11%、90.06%,粒径为123.1 nm、128.4 nm、132.7 nm。4℃避光存放10天比较稳定,与姜黄素纳米脂质载体组相比PEG修饰的姜黄素纳米脂质载体及甘草次酸修饰的姜黄素长循环纳米脂质载体稳定性稍差。
以人肝癌细胞株HepG2为细胞模型,通过细胞摄取实验考察癌细胞对溶液组及各制剂的摄取情况。将溶液组及各制剂与HepG2细胞孵育0.5h,1h,2h,4h和6h后,分别测定细胞中的荧光强度。实验结果表明,有甘草次酸介导的纳米脂质载体在HepG2细胞中摄取量最显著,而三种不同靶头量介导的姜黄素长循环纳米脂质载体中,靶头量为10%的制剂摄取量较多。用MTT法测定了姜黄素溶液、姜黄素纳米脂质载体、PEG修饰的姜黄素纳米脂质载体和甘草次酸介导的姜黄素长循环纳米脂质载体的体外细胞毒。实验表明,甘草次酸介导的姜黄素长循环纳米脂质载体比普通纳米脂质载体及PEG修饰的姜黄素纳米脂质载体更能有效地抑制HepG2细胞的生长,具有较小的IC50值。