两种喜树内生真菌和白刺花化学成分研究

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植物内生真菌是一类特殊的微生物,广泛存在于健康植物组织中,其代谢产物种类繁多,是新颖骨架化合物的重要来源之一。研究来自不同寻常或特殊培养基的微生物的代谢产物可以增加发现结构新颖以及具有生物活性化合物的机会。众所周知的抗癌药物喜树碱以及其衍生物羟基喜树碱是喜树(Camptotheca acuminate Decne)自身二次代谢物,有报道称,从喜树中分离纯化到的内生真菌可以生成10-羟基喜树碱。因此,分离出来源于喜树的内生真菌,研究它们的二次代谢物,可能会发现具有新颖结构和良好生物活性的化合物。本研究以生物活性为导向,运用各种色谱分离技术对两种喜树内生真菌和药用植物白刺花的化学成分进行纯化分离、结构鉴定以及单体化合物的药理活性测试,以发现结构新颖以及具有良好生物活性的天然产物。本研究分离并鉴定了71个化合物,这些化合物结构类型多样,涵盖了甾醇、萜类、丁烯酸内酯类、呋喃酮类、萘醌类、大环肽类、四元环内酯类、脑苷类、异黄酮类、苦参类生物碱以及喹诺里西啶类生物碱等,其中新化合物8个。另外对部分单体化合物的抗肿瘤活性以及抗糖尿病活性进行了筛选。枝孢样枝孢菌(Cladosporium cladosporioides,XS2)是一种能够产生分生孢子的霉菌,属于半知菌中的一种,它常见于活的或死掉的作物上。有些寄生在作物上甚至会使得作物染病。枝孢霉的孢子分布广泛,在户外的空气中含量丰富。而在室内,当潮气太重的时候,它们会在器具表面生长。从枝孢样枝孢菌在大米固体培养基发酵物的乙酸乙酯提取物(XS2-EtOAc)中分离得到19个化合物。化合物经一维、二维的核磁共振波谱及质谱分析鉴定为麦角甾醇(1)、β-谷甾醇(2)、terretonin(3)、terretonin A(4)、terretonin C(5)、terretonin B(6)、3-羟基-4-(4-羟苯基)-5-[(4-羟苯基)甲基]-2-呋喃酮(7)、butyrolactone II(8)、4-羟基-3-(4-羟苯基)-[2-(对甲苯苄基)]-2-呋喃酮酸甲酯(9)、butyrolactone I(10)、butyrolactone V(11)、aspernolide A(12)、洛伐他汀(13)、(1α,2α,4α)-4-[(1E)-1-丙烯基]-1,2-环戊二醇(14)、鲸蜡醇(15)、aspterpenacids A(16)、(3R,4R)-6,7-二甲氧基-4-羟基蜂蜜曲霉素(17)、aspulvinone K-CR(18)和aspulvinone F(19)。其中,化合物12显示出对喉癌细胞中Hep-2有较好的抑制作用。从波兰青霉菌(Penicillium polonicum,XS3)的乙酸乙酯部位(XS3-EtOAc)中共分离得到25个化合物,其中新化合物7个;这些化合物经一维、二维的核磁共振波谱及质谱分析鉴定为镰红菌素(20)、镰红菌素甲醚(21)、爪哇镰菌素(22)、去水镰红菌素(23)、2-异丙基-3-甲基-7-甲氧基-萘茜(24)、3,5-二羟基二氢镰红菌素D(25)、neovasinin(26)、walterolactone B(27)、3,6-二甲基-4-羟基-二氢吡喃酮(28)、5,6-二氢-4-甲基-二氢吡喃酮(29)、4,5-二甲基-2-(1-甲基丙基)-3-呋喃甲酸(30)、罗布麻宁(31)、N-甲基-(2-亮氨酰基)丙酰胺(32)、1233 A(33)、polonicin A(34)、(9反,12反)-二烯十八烷酸十三烷酯(35)、chrysogesides B(36)、polonicin G(37)、polonicin B(38)、环孢菌素A(39)、环孢菌素E(40)、polonicin C(41)、polonicin D(42)、polonicin E(43)和polonicin F(44)。针对纯化分离所得的其中9个化合物(21-25,33,34,38)进行了GLUT4转膜活性筛选。实验结果显示,3个化合物具有良好的促GLUT4转膜活性,荧光强度分别增强1.35-1.80倍,其中新化合物Polonicin A(34)的效果最好,为1.80倍。随后针对化合物34进行了量效关系实验,发现34在浓度为30μg/mL时便有较明显的转膜活性。从豆科槐属植物白刺花(Sophora davidii(Franch.)Skeels)的石油醚部位,酸性乙酸乙酯部位以及碱性乙酸乙酯部位(生物碱部位)中共分离得到27个化合物。其中石油醚部位分离得到8个化合物,其中黄酮类化合物6个,化合物45为新化合物,经一维、二维核磁共振波谱及质谱分析鉴定为leachianone H(45),其余化合物鉴定为leachianone A(46)、leachianone B(47)、exiguachromone A(48)、高丽槐素(49)、紫檀芪(50)、金合欢素(51)、芹黄素(52);酸性乙酸乙酯部位分离得到16个化合物,其中异黄酮类化合物12个,分别鉴定为苜蓿内酯(53)、白藜芦醇(54)、异芒柄花黄素(55)、伪野靛素(56)、3’-甲氧基大豆黄素(57)、3’,4’-二甲氧基-7-羟基异黄酮(58)、红车轴草素(59)、鹰嘴豆芽素A(60)、毛蕊异黄酮(61)、金雀异黄素(62)、4’,5,7-三羟基-6-甲基异黄酮(63)、甘草甜素(64)、银松素(65)、7,5’-二羟基-3’-甲氧基异黄酮(66)、7,4’-二羟基-3’,5’-二甲氧基异黄酮(67)、5,7,2-三羟基-4-甲氧基异黄酮(68);从生物碱部位分离纯化得到3个化合物,2个苦参类生物碱化合物鉴定为槐果碱(69)、氧化槐果碱(71),1个喹诺里西啶类生物碱鉴定为(-)-N-甲基金雀花碱(70)。
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