青海血蜱(Haemaphysalis qinghaiensis)及其传播的疾病严重威胁着我国畜牧业的发展。目前,对蜱的控制方法主要是应用化学药物灭蜱,但随着蜱耐药性的产生以及环境污染和药物残留等严重公共卫生问题的出现迫使人们寻求防治的新途径。在众多控制蜱的方法中,免疫学防制是前景最诱人的方法之一。将青海血蜱成蜱cDNA表达文库与宿主菌BL21(DE3)pLysE按一定比例混合孵育并铺板,当噬斑出现后将NC膜覆盖于顶层胶表面并继续培养3.5 h。随后,将此NC膜依次与抗青海血蜱幼蜱阳性血清和碱性磷酸酶标记的羊抗兔IgG反应,最后加底物显色,初步筛选得到蓝紫色的阳性克隆,并复筛直至整个膜上均为阳性信号为止。用所得阳性噬菌体转染宿主菌BM25.8使之自动亚克隆为重组质粒,用此亚克隆质粒转化宿主菌JM109并从中提取重组质粒进行PCR和测序。序列分析结果表明:共获得10个基因,分别命名为HqLA-1、HqLA-2、HqLA-3、HqLA-4、HqLA-5、HqLA-6、HqLA-7、HqLA-8、HqLA-9和HqLA-10,它们的大小分别为798bp、421bp、637bp、392bp、297bp、1473bp、626bp、201bp、989bp和551bp。其中HqLA-1～HqLA-9为青海血蜱所固有的新发现基因,提交至GenBank/NCBI获取序列号,序列号分别为FE674076、FE674077、FE674078、FE674084、FE674079、FE674080、FE674081、FE674082和FE674083。其中HqLA-2、HqLA-6、HqLA-7、HqLA-9和HqLA-10共5个基因成功进行诱导表达,表达产物的分子量为47kDa、87kDa、48kDa、57kDa和68kDa。利用表达产物蛋白能与抗青海血蜱幼蜱阳性血清发生免疫学反应,发现基因HqLA-7、HqLA-9的表达产物具有较好的反应原性。这为研制青海血蜱的分子疫苗奠定了基础。本研究利用兔抗青海血蜱幼蜱阳性血清对已构建的青海血蜱成蜱cDNA表达文库(高金亮构建)进行免疫学筛选,则所获得抗原基因在理论上对青海血蜱幼蜱和青海血蜱成蜱均具有保护性。