TGF-β1是转化生长因子β(Transforming Growth Factor β,TGF-β)家族中的重要一员,在正常细胞和肿瘤的早期阶段具有阻滞细胞周期G1/S期进展,诱导细胞分化和凋亡的作用。但在肿瘤发展的后期,TGF-β1反而会促进肿瘤的生长和转移。前期基因沉默和过表达的研究结果表明LBH基因表达能抑制鼻咽癌细胞的增殖,阻滞细胞周期G1/S期的进展。为进一步明确TGF-β1与LBH基因在抑制NP69细胞生长方面的关系,本课题以正常鼻咽上皮细胞NP69为模型,采用外源TGF-β1刺激和基因沉默技术探讨TGF-β1刺激对LBH基因表达的影响以及它们在抑制NP69细胞生长方面的相互关系,从而为更好地研究TGF-β1和LBH基因在鼻咽癌发生发展机制中的作用奠定理论基础。　　目的:　　以LBH基因表达正常的人鼻咽上皮细胞NP69为模型,通过外源TGF-β1刺激和基因沉默技术调控LBH基因的表达,阐明TGF-β1刺激与LBH基因表达在抑制NP69细胞生长中的相互关系。　　方法:　　1.MTT法检测不同浓度梯度的TGF-β1在不同时间点对NP69细胞生长的影响,确定TGF-β1的最佳作用浓度;　　2.MTT法检测LBH基因沉默后TGF-β1刺激对NP69细胞生长的影响;　　3.采用Real-Time quantitative PCR和Western Blot技术检测TGF-β1刺激后LBH和C-Myc基因的mRNA及蛋白的表达情况;　　4.应用流式细胞术(Flow cytometry)检测TGF-β1刺激和LBH基因沉默后再行TGF-β1刺激对NP69细胞周期的影响;　　5.进一步采用双报道系统探讨TGF-β1刺激和LBH基因沉默对NF-κB转录活性的影响,为细胞周期基因调控机制研究提供新的线索。　　结果:　　1.通过对不同浓度TGF-β1对NP69细胞生长抑制的检测,结果表明,终浓度为10ng/mL的TGF-β1在72h时即能明显抑制NP69细胞的生长,96h时抑制效果更为显著;　　2.qRT-PCR检测结果表明,TGF-β1刺激24h后LBHmRNA的表达量相当于对照组的4.9倍,C-MycmRNA的表达量相当于对照组的64％,Western blot检测发现刺激组的C-Myc蛋白表达量相对于对照组也出现明显下调;　　3.双荧光素酶报道系统检测表明,相对对照组,TGF-β1刺激6h后NF-κB启动子的转录活性下调24%,12h后下调26%;　　4.流式细胞仪检测结果表明,对照组中G1期和S期的细胞数分别占总细胞数的52.68%和46.55%,TGF-β1刺激组中G1期和S期细胞的比例分别为59.20%和40.56%,表现为G1期增多及S期阻滞的特点;　　5.qRT-PCR检测结果表明40nM的LBH-siRNA转染NP69细胞24h、48h和72h后其LBH基因mRNA的相对表达量分别为对照组的12%、10%、24%,48h后mRNA沉默效果最为显著,沉默效率比较稳定,能够有效开展后续实验;　　6.LBH基因沉默后TGF-β1刺激对NP69细胞的生长并无显著抑制作用,对其细胞周期进展和NF-κB转录活性亦无显著影响;　　结论:　　TGF-β1刺激能够上调LBH基因的表达,下调NF-κB启动子的转录活性,下调C-Myc的表达,阻止细胞周期G1/S期的进展,从而显著抑制NP69细胞的生长。NP69细胞中LBH基因被有效沉默后再进行TGF-β1刺激并不能抑制细胞生长,对其细胞周期进展和NF-κB转录活性亦无显著影响。综上,TGF-β1可能通过LBH基因下调NF-κB转录活性,继而下调C-Myc的表达,调控细胞周期进展,从而对细胞增殖产生影响。