目的：　　（1）观察大鼠脑缺血/再灌注时脑缺血半暗区线粒体动力相关蛋白1的表达及其与线粒体外膜结合程度的变化，在氧化应激水平及 Drp1（Ser616）磷酸化水平探讨脑缺血/再灌注时Drp1活化的机制；　　（2）观察电针预处理对大鼠脑缺血/再灌注时脑缺血半暗区线粒体动力相关蛋白1的表达及活性的影响，在氧化应激水平及 Drp1 （Ser616）磷酸化水平探讨电针预处理抑制线粒体动力相关蛋白1活化及发挥脑保护作用的机制。　　方法：　　225只SPF级（specific-pathogen-free）雄性SD（Sprague-Dawley）大鼠，8~12月龄，300±20g，按照随机数字表分为三组：假手术组（Sham group），电针预处理+缺血/再灌注组（I/R+EA group）和单纯缺血/再灌注组（I/R group），每组75例。I/R+EA组在建立脑缺血/再灌注模型前，连续 5天电针刺激百会穴（GV20），大鼠百会穴定位于大鼠双耳连线与正中矢状面交点处，刺激强度 1mA，疏密波频率 2/15Hz，持续时间 30 分钟，以大鼠尾部微颤为穴位刺激有效标志，最后一次电针刺激后 24h 制作大鼠大脑中动脉栓塞（middle cerebral artery occlusion，MCAO）模型，其余两组未行电针预处理。I/R+EA组和I/R组通过线栓法制作大鼠MCAO模型，血流阻断2 h后拔除线拴恢复脑血流灌注，假手术组只分离大鼠颈部血管，未进行大脑中动脉栓塞。若在实验过程中有大鼠死亡，补充相应数量的大鼠入组。　　观察指标：　　（1）按照 Zea Longa 评分法对三组大鼠缺血/再灌注或假手术操作后6h、24h、48h 进行神经功能缺陷评分，评分越高说明脑损伤越严重，1~3 分判定为模型制作成功，纳入实验。　　（2）TTC染色法观察缺血/再灌注或假手术操作后24h大脑梗死情况。并通过公式脑梗死容积百分比=（对侧正常脑组织容积-同侧正常脑组织容积）/（对侧正常脑组织容积）×100%计算梗死容积百分比。　　（3）HE 染色观察缺血/再灌注或假手术操作后6h、24h、48h 大脑皮层缺血半暗区神经元形态改变。　　（4）Tunel染色观察缺血/再灌注或假手术操作后24h大脑皮层缺血半暗区神经元凋亡情况，并通过公式神经元细胞调亡率＝视野内调亡细胞计数/视野内所有细胞计数×100%计算神经元凋亡率。　　（5）过氧化脂质降解产生丙二醛（MDA），于再灌注或假手术操作后 6h、24h、48h采用硫代巴比妥酸法测定缺血半暗区脑组织 MDA的含量。　　（6）再灌注或假手术操作后 6h、24h、48h 采用黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶（SOD）活力， 检测 MDA含量和 SOD活力以反映脑组织氧化应激水平。　　（7）Drp1 是线粒体分裂体系的重要组成部分，Drp1 活化后由胞浆转移至线粒体外膜引发线粒体分裂。Western blot检测再灌注或假手术操作后 6h、24h、48h大脑皮层缺血半暗区总的 Drp1表达水平，采用梯度离心法提取线粒体后，Western blot 法检测结合到线粒体外膜 Drp1 水平，荧光实时定量PCR法检测缺血/再灌注或假手术操作后6h、24h、48h缺血半暗区Drp1 mRNA水平。　　（8）Western blot法检测再灌注或假手术操作后6h、24h、48h大脑皮层缺血半暗区磷酸化 Drp1（Ser616）水平，并计算其与总 Drp1 比值。　　（9）细胞色素 C从断裂的线粒体释放入胞浆后，神经元的凋亡将不可避免发生，检测细胞色素 C尤其是胞浆内细胞色素 C的水平能反应线粒体功能的变化。采用 Western blot法检测缺血/再灌注或假手术操作后 6h、24h、48h大脑皮层缺血半暗区总的细胞色素 C表达水平，分离线粒体和胞浆后，Western blot 法检测缺血/再灌注或假手术操作后 6h、24h、48h 大脑皮层缺血半暗区胞浆内细胞色素 C 的水平。　　（10）透射电镜下观察再灌注或假手术操作后 24h 大脑皮层缺血半暗区神经元及线粒体超微结构形态改变，并计算线粒体纵横比，空泡线粒体率，空泡化线粒体平均密度，以反映线粒体分裂程度，线粒体形态改变。　　统计学分析：数据采用SPSS 21.0统计学软件进行分析，计量资料以均数±标准差( x ±s)表示，组间比较采用单因素方差分析，两组间比较采用SNK检验，P<0.05为差异有统计学意义。　　结果：　　（1）与Sham组相比，I/R+EA组和I/R 组大鼠缺血/再灌注或假手术操作后6h、24h、48h神经功能缺陷评分升高（P<0.01）；与I/R+EA组相比，I/R组6h、24h、48h评分升高（P<0.05）。　　（2）正常脑组织TTC染色呈红色，而梗死脑组织TTC染色呈苍白色。TTC染色显示，Sham组大鼠大脑中动脉供血区域无明显梗死灶，与Sham组相比，I/R+EA组和I/R组再灌注或假手术操作后24h大脑皮层梗死容积百分比明显增加（P<0.01）；与 I/R+EA组相比，I/R组大鼠缺血/再灌注后 24h大脑皮层梗死容积百分比明显增加（P<0.05）。　　（3）HE 染色显示：Sham 组神经元形态完整，轮廓清晰，神经元细胞核核膜清楚，核仁明显，未见明显形态学改变；缺血/再灌注后 6h、24h、48h I/R组大鼠缺血半暗区脑组织可见大量神经元水肿，细胞核不规则浓缩、变形、致密，核仁难以辨识，胶质细胞呈空泡样变性；与 I/R组相比，I/R+EA组神经元水肿减轻，核浓缩程度降低，神经元形态改变减轻。　　（4）Tunel染色显示：假手术操作后24h时， Sham 组大鼠脑组织极少出现呈棕黄色或棕褐色细胞，即 Tunel 阳性细胞；I/R+EA组和I/R组在再灌注后24h，Tunel阳性细胞率明显增加（P<0.01），而I/R+EA 组 Tunel 阳性细胞率明显低于 I/R 组（P<0.05），说明凋亡神经元比率下降。　　（5）与Sham 组相比，I/R 组缺血/再灌注后 6h、24h、48h MDA 含量明显增加（P<0.01）， I/R+EA 组在再灌注后 24h、48h MDA 含量明显增加（ P<0.01 ）；与 I/R 组相比， I/R+EA组再灌注后 6h、24h、48hMDA 含量降低（P<0.05）。　　（6）与 Sham 组相比， I/R+EA 组和 I/R 组缺血/再灌注后 6h、24h、48h 缺血半暗区脑组织 SOD 活性下降（ P<0.05 ）；与 I/R 组相比， I/R+EA 组再灌注后 6h、24h、48h SOD 活性升高（P<0.05）。　　（7）Western blot结果显示：与 Sham组相比，I/R+EA组和 I/R组缺血/再灌注后6h、24h、48h缺血半暗区脑组织总的Drp1表达上调，结合到线粒体外膜Drp1水平升高（P<0.01）；荧光实时定量 PCR 结果显示：与 Sham 组相比，I/R+EA 组和I/R组缺血/再灌注后 6h、24h、48hDrp1 mRNA表达上调；与 I/R+EA组相比，I/R组大鼠缺血/再灌注后6h、24h总的Drp1表达及Drp1 mRNA水平明显增加（P<0.05）；与 I/R+EA组相比，I/R组缺血/再灌注后 6h、24h、48h结合到线粒体外膜的 Drp1水平升高（P<0.05）。　　（8）与Sham组相比，I/R+EA组和I/R 组大鼠缺血/再灌注后6h、24h、48h 脑缺血半暗区磷酸化 Drp1（Ser616）与总 Drp1 比值升高（P<0.01）；与I/R+EA组相比，I/R组缺血/再灌注后6h、24h、48h磷酸化Drp1（Ser616）与总Drp1比值升高（P<0.05）。　　（9）与 Sham 组相比，I/R+EA 组和 I/R 组缺血/再灌注后 6h、24h、48h 大鼠脑缺血半暗区总的 Cyt C 和胞浆内 Cyt C 表达上调（ P<0.05 ）；与I/R+EA组相比，I/R 组缺血/再灌注后 6h、24h总的 Cyt C水平明显增加（P<0.05）；与 I/R+EA 组相比， I/R 组缺血/再灌注后 6h、24h、48h 胞浆内 Cyt C 水平升高（P<0.05）。　　（10）透射电镜下神经元及线粒体形态显示：假手术操作后 24h，Sham组缺血半暗区细胞形态正常，线粒体结构双层膜结构完整；缺血/再灌注后 24h，I/R 组线粒体出现破坏迹象，典型的管状或椭圆形形态减少或消失，双侧膜结构模糊难以辨认，出现空泡化、片段化，线粒体嵴肿胀；与 I/R 组相比，I/R+EA 组线粒体肿胀减轻，片段化空泡化线粒体减少，形态改变减轻；缺血/再灌注或假手术操作后 24h，线粒体纵横比 Sham组明显大于 I/R+EA组和 I/R组（P<0.01），I/R+EA组大于 I/R+组（P<0.05）；空泡线粒体率及空泡线粒体平均面积密度 I/R+EA 组和 I/R 组明显高于Sham组（P<0.01），I/R+EA组明显低于I/R组（P<0.05）。　　结论：　　（1）大鼠局灶性脑缺血/再灌注后动力相关蛋白1（Drp1）的表达上调，同时氧化应激水平升高及Drp1（Ser616）磷酸化水平增加，引起胞浆内Drp1的活化，导致Drp1与线粒体外膜结合增多，线粒体分裂增加，细胞色素C释放，最终诱导神经元凋亡。　　（2）电针预处理下调总 Drp1表达，并可能通过降低氧化应激水平、减少 Drp1（Ser616）磷酸化水平，从而抑制 Drp1活性，减少 Drp1定位到线粒体外膜程度，抑制线粒体过度分裂，从而减少细胞色素 C释放入胞浆水平，缓解神经元凋亡，发挥脑保护作用。