大庆林甸温泉嗜热菌分离鉴定及其生长特性研究

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目的:嗜热微生物(Thermophiles)是极端微生物的一个分类,生长于自然或人工高温环境中,嗜热微生物及所产生的嗜热酶有实际的应用潜力。陆地热泉作为典型的地热生境之一,为嗜热微生物的生长提供了理想的条件,对其进行微生态研究,有助于认识高温环境中的微生物遗传多样性与功能多样性。目前,国内外对黑龙江省地区温泉的相关研究未见报道。因此取大庆林甸温泉水样进行嗜热菌的分离、筛选、鉴定,并探讨其生理生化特性,以了解该地区温泉生态环境下微生物群落的分布情况。  方法:于大庆林甸两处温泉采集水样,并记录其pH值及温度。对采集样品进行富集培养,并运用稀释平板涂布法,进行嗜热菌的分离,纯化获得单一菌落。对分离纯化的菌株进行全菌体蛋白SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析,结合细菌形态学及生理生化特征进行鉴定,并进行细菌16SrDNA基因序列比对分析及构建菌株系统进化树。将菌株分别在不同温度及pH值条件下进行培养,间隔2h取样测量OD600值,绘制不同条件下的生长曲线,根据细菌生长特性计算生长代时并进行最适温度下生长曲线的制作。  结果:全菌体蛋白SDS-PAGE比较分析,得到6种不同电泳条带,初步判断分离出6株嗜热菌,均为革兰阳性菌,菌体杆状,直或接近直,均有芽孢、荚膜、鞭毛,芽孢为端生或次端生。V-P试验、触酶试验、氧化酶试验、明胶液化试验均阳性,并能降解淀粉。6株菌生长温度范围35~65℃,pH值范围4.5~11.5。NaCl耐盐度约为0~1%。6株嗜热菌的16SrDNA之间同源性为99%;D1,D3,D5,D6与Anoxybacillus flavithermus属之间的同源性为99%;D2,D4与Anoxybacillus pushchinoensis属之间的同源性为99%。  结论:本研究所分离的6株嗜热菌株经鉴定,初步判定为Anoxybacillus属的不同种,并具有淀粉酶,氧化酶,过氧化氢酶,蛋白酶酶类活性;全菌体蛋白SDS-PAGE与16SrDNA基因序列分析相结合,可以高效、快速的对大量的分离菌株进行分析鉴定;黑龙江省内具有丰富的嗜热微生物资源,开发价值潜力巨大。
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