Phloretin对猪皮下与肌内脂肪前体细胞分化及相关基因表达的影响

来源 :中国畜牧兽医学会动物营养学分会第十一次全国动物营养学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zmaozhao
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  根皮素(phloretin)是一类普遍存在于果皮及根茎中的黄酮类物质,具有抗氧化、清除自由基、抑制葡萄糖及长链脂肪酸的转运吸收等多种生物学活性,但目前有关根皮素对脂肪细胞分化的调控作用的研究鲜见报道。本研究旨在探讨根皮素对仔猪皮下与肌内脂肪前体细胞分化及其相关基因表达的影响。采用胶原酶消化法分别从5日龄长白仔猪背部皮下脂肪组织与背最长肌肌肉组织中分离、培养皮下和肌内脂肪前体细胞并纯化。待细胞融合至80%~90%时,除去基础培养基,用含有地塞米松、胰岛素、油酸和辛酸的诱导分化培养液诱导脂肪前体细胞分化成熟(对照组),同时在诱导分化培养液的基础上添加根皮素处理脂肪前体细胞(试验组);诱导分化后,采用甘油三酯试剂盒检测细胞内甘油三酯含量、采用葡萄糖和游离脂肪酸试剂盒检测细胞对葡萄糖和游离脂肪酸的吸收量、采用实时荧光定量RT-PCR和Western Blot检测与脂肪细胞分化密切相关基因的mRNA及蛋白水平的表达。结果显示:(1)甘油三酯含量检测结果,与对照组相比,诱导分化后第2天、4天、6天,50μmol/L、100μmol/L和200μmol/L根皮素均显著降低皮下和肌内脂肪细胞内甘油三酯含量,并呈现剂量依赖性效应。(2)葡萄糖及游离脂肪酸检测结果显示,诱导分化后第5~6天,皮下脂肪细胞中,根皮素仅显著抑制游离脂肪酸的吸收;肌内脂肪细胞中,根皮素仅显著抑制葡萄糖的吸收。(3) mRNA及蛋白水平检测结果发现,诱导分化6天,根皮素处理组两种细胞内PPARγ和C/EBPα的mRNA及蛋白表达量均显著低于对照组;脂滴包被蛋白perilipin的mRNA表达水平也显著低于对照组,蛋白水平只在皮下脂肪细胞中检测到表达并与mRNA水平一致;在肌内脂肪细胞中,根皮素处理组的脂肪酸合成相关酶FASN与ACCα mRNA及蛋白水平均显著低于对照组,但皮下脂肪细胞中无差异;而脂肪酸转运相关基因aP2和CD36及脂肪分解相关基因ATGL和HSL的表达模式在肌内与皮下脂肪细胞中呈现相反的变化,皮下脂肪细胞中根皮素处理组mRNA水平高表达,在肌内脂肪细胞中则为低表达。结果提示,不同浓度的根皮素均显著抑制皮下和肌内脂肪前体细胞的分化聚酯并表现出剂量依赖效应;皮下脂肪前体细胞可能优先利用游离脂肪酸分化聚酯,而肌内脂肪前体细胞则可能优先利用葡萄糖;但相关基因mRNA及蛋白表达模式上存在一定的差异,由此推测根皮素可能通过不同的胞内信号通路及调节机制抑制两种脂肪前体细胞的分化。
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