【摘 要】
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根据GenBank中登录的猪流感病毒参照序列设计了扩增神经氨酸酶(NA)基因的特异性引物.从猪流感抗毒A/Swine/Inner Mongolia/547/01(H3N2)株感染的鸡胚液中直接提取病毒RNA,经R
【机 构】
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中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点开放实验室(黑龙江哈尔滨)
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根据GenBank中登录的猪流感病毒参照序列设计了扩增神经氨酸酶(NA)基因的特异性引物.从猪流感抗毒A/Swine/Inner Mongolia/547/01(H3N2)株感染的鸡胚液中直接提取病毒RNA,经RT-PCR扩增后将其克隆到pMD18-T载体上,进行序列测定和拼接.用HindⅢ酶切后,亚克隆到杆状病毒转移载体pMeLBacB上,得到重组转移载体pMelBacNA,然后与线性化杆状病毒DNA(Bac-N-BlueDNA)共转染于sf9昆虫细胞.经3轮噬斑纯化,提取其DNA经PCR鉴定,获得重组杆状病毒株.SDS-PAGE结果显示,目的基因已获得表达,Western blot和神经氨酸酶活性检测结果显示表达产物具有良好的免疫原性和神经氨酸酶活性,为SIV亚单位疫苗和NA基因的深入研究奠定了基础.
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