【摘 要】
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将猪口蹄疫病毒的VP1基因通过RT-PCR方法从细胞病毒液中扩增后克隆进pGEM-T Easy载体,通过酶切、PCR和测序验证克隆正确,再亚克隆到真核表达载体pcDNA-3.1(+)上,得到重组质粒
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将猪口蹄疫病毒的VP1基因通过RT-PCR方法从细胞病毒液中扩增后克隆进pGEM-T Easy载体,通过酶切、PCR和测序验证克隆正确,再亚克隆到真核表达载体pcDNA-3.1(+)上,得到重组质粒pcDNA-VP1.同时根据获得的猪口蹄疫病毒VP1基因的序列,结合相关的文献资料,设计合成免疫串联片F,F含有VP1基因的主要抗原位点141~160及200~213位的氨基酸序列,将F片段克隆到真核表达载体pcDNA-3.1(+)中,得到重组质粒pcDNA-F.重组质粒pcDNA-VP1和pcDNA-F在脂质体介导下转染Vero细胞,通过间接免疫荧光分析,表明VP1基因和F基因均在Vero细胞中成功进行了瞬时表达.为进一步研制FMD基因疫苗奠定了基础.
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