【摘 要】
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目的 在确认肝星状细胞(HSC)存在自噬现象的基础上,通过体外调节HSC自噬水平,观察自噬水平改变对HSC增殖和前胶原表达的影响,探讨以自噬信号通路为靶点治疗肝纤维化的可
【机 构】
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530021 南宁,广西壮族自治区人民医院消化内科
【出 处】
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The 14th Congress of Gastroenterology China(第十四届全国消化系病学术会议)
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目的 在确认肝星状细胞(HSC)存在自噬现象的基础上,通过体外调节HSC自噬水平,观察自噬水平改变对HSC增殖和前胶原表达的影响,探讨以自噬信号通路为靶点治疗肝纤维化的可行性,为抗肝纤维化治疗提供新的理论依据.方法 梯度密度法分离和培养原代大鼠HSC,透射电子显微镜观察大鼠HSC的自噬超微形态学特征,单丹磺酰尸胺(MDC)染色法结合荧光显微技术观察HSC的自噬溶酶体表达,Western印迹检测HSC的自噬信号分子蛋白,RT-PCR检测HSC的工型前胶原mRNA,细胞效价非放射性细胞增殖试剂盒方法分析HSC增殖.应用自噬信号促进剂、抑制剂观察HSC自噬水平的应答变化,分析与HSC增殖、胶原生成等靶效应间的关系.结果 成功分离和培养原代大鼠HSC.观察到HSC自噬形态学特征,检测到HSC中存在自噬信号通路的相关基因和蛋白表达.自噬促进剂雷帕霉素促进HSC自噬溶酶体荧光颗粒表达,而自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)则相反.与对照组相比,雷帕霉素上调HSC的自噬相关蛋白ATG5、Beclin1、LC3Ⅱ表达,而3-MA则显著下调HSC自噬分子蛋白表达,差异均有统计学意义.与对照组相比,雷帕霉素增加HSC的Ⅰ型前胶原mRNA表达,相反,3-MA和羟氯喹则减少HSC的I型前胶原mRNA表达,差异均具有统计学意义.与对照组相比,3-MA和羟氯喹均抑制HSC增殖,且呈浓度依赖性,差异具有统计学意义.结论 本研究确认HSC存在自噬现象,抑制自噬可抑制HSC的增殖和前胶原mRNA的表达,提示自噬信号通路为治疗肝纤维化的新靶点.
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